三七总皂苷对高氧诱导的新生小鼠视网膜病变LncRNAs的影响

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目的观察三七总皂苷对高氧诱导的视网膜病变(Oxygen-induced retinopathy,OIR)新生小鼠视网膜新生血管及视网膜组织中长链非编码RNA(Long non-coding RNAs,lnc RNAs)的影响,探讨其可能的作用机制,为三七总皂苷治疗早产儿视网膜病变(Retinopathy of prematurity,ROP)提供相应的实验依据。方法采用经典的Smith造模法建立OIR新生小鼠模型。80只C57BL/6J新生小鼠,随机对照平均分为四组:A组(正常对照组)、B组(OIR组)、C组(三七总皂苷组)、D组(PBS组)。正常对照组在常氧环境中饲养直至出生后(Postnatal,P)第17天。P7至P11,B组、C组、D组都在75%的高氧浓度中饲养。P12,C组小鼠眼球玻璃体腔注射1μL三七总皂苷,D组小鼠眼球玻璃体腔注射1μL的PBS无菌溶液,此后一直在正常空气中饲养到P17。P17处死全部小鼠,取视网膜组织。心脏荧光灌注异硫氰酸荧光素葡聚糖(Fuorescein isothiocyanate,FITC-dextran)后视网膜铺片,观察各组视网膜血管的形态变化;HE染色计量突破视网膜内界膜新生血管内皮细胞核数;免疫组化检测VEGF的表达情况;反转录PCR(Reverse transcription-PCR,RT-PCR)检测Lnc RNA XLOC150636、XLOC150632、XLOC122045、XLOC122042、XLOC100454、XLOC170009的m RNA表达变化;Western blot检测VEGF,FGF2蛋白的表达变化。结果视网膜铺片显示,OIR组与正常对照组相比,可见视网膜形态异常,大量视网膜新生血管丛和无灌注区,视网膜血管明显增生弯曲。三七总皂苷治疗后视网膜血管弯曲增生明显减轻,无灌注区减少。PBS治疗后仍可见大量弯曲增生的血管丛。HE染色观察发现,OIR组和PBS组出现大量突破视网膜内界膜内皮细胞核,正常对照组和三七总皂苷组仅见少量突破视网膜内界膜内皮细胞核。免疫组化结果显示,正常对照组有少量VEGF的表达,OIR组和PBS组中VEGF的表达显著升高,三七总皂苷组的结果与正常对照组类似。RT-PCR检测XLOC150636、XLOC150632在OIR组中表达明显上调,在三七总皂苷组中显著下调,PBS组中无明显变化。XLOC122045、XLOC122042、XLOC100454、XLOC170009在OIR组中表达明显下调,在三七总皂苷组中显著上调,PBS组中与OIR组比较无明显改变。Western blot检测,正常对照组中有少量VEGF和FGF2蛋白表达,OIR组VEGF和FGF2的蛋白表达明显增加,三七总皂苷治疗后,VEGF和FGF2的蛋白表达明显减少,PBS治疗后VEGF和FGF2的蛋白表达水平仍明显增加。结论三七总皂苷可调节高氧诱导的新生小鼠视网膜病变Lnc RNAs的表达,抑制视网膜新生血管的增生。
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