论文部分内容阅读
随着人口老龄化的趋势加快,脑血管病已经成为我国第一位致残和死亡原因,对该病的研究一直是科研和临床研究的热点。脑缺血预处理(cerebral ischemic preconditioning,CIP)是指对脑组织采用缺血处理,如一次或多次短暂性、非致死性脑缺血再灌注(ischemia-reperfusion,I/R)刺激,启动脑组织产生内源性保护机制,将对致死性的缺血产生显著的耐受,从而减弱或阻止脑缺血缺氧引起的瀑布反应。炎性反应在缺血再灌注损伤的机制中占重要地位,包括一系列炎症细胞和炎症因子的参与,还涉及到固有免疫系统和适应性免疫系统的激活,起到了免疫调节和趋化作用,因此减轻炎症反应是治疗缺血性脑血管病的重要环节。炎症过程中,高迁移率族蛋白B1(high mobility group protein,HMGB1)主动分泌至胞外,与晚期糖基化终末产物受体(receptor for advanced glycation end-products,RAGE)和Toll样受体4(Toll-like receptor 4,TLR4)结合,最终激活核因子κB(Nuclear factor-kappa B,NF-κB),从而介导炎性反应。本研究通过建立大鼠局灶性CIP模型,深入研究RAGE和TLR4在CIP的生物学作用及可能机制,为再灌注损伤的临床防治提供新的靶点。将198只Sprague Dawley成年雄性健康大鼠随机分为假手术组(Sham,n=66)、缺血预处理组(CIP,n=66)和缺血再灌注组(I/R,n=66),采用改良的Zea-Longa方法制备大鼠大脑中动脉栓塞(MCAO)模型,缺血再灌注组给予缺血2小时后恢复血流,缺血预处理组采用二次线栓法,缺血10分钟为预处理措施,72小时后给予缺血2小时再恢复脑部血流,假手术组仅分离颈总动脉,不给于栓塞处理。随机分为再灌注后0.5 d,1 d,2 d,3 d,7 d共5个时间点,于再灌注1d时每组随机选取6只采用TTC染色法用于测定脑梗死体积,各个时间点采用Zea Longa评分标准进行神经功能评分,通过免疫组织化学染色法测定RAGE和TLR4蛋白水平的表达变化,定量即时聚合酶链锁反应(Real-time Quantitative Polymerase Chain Reaction,RT-qPCR)法测定RAGE和TLR4 mRNA表达。本研究发现,Sham组无梗死灶,CIP组在1 d时脑梗死体积为明显低于I/R组(P<0.05);Sham组无神经功能缺损,CIP组大鼠在0.5 d、1 d、2 d、3 d、7 d的神经功能行为缺陷评分与I/R组大鼠比较明显减低,有显著性差异(P<0.05);与sham组相比,CIP组与IR组缺血半暗带区RAGE阳性细胞数显著升高(P<0.05),CIP组较I/R组的表达明显降低(P<0.05),TLR4阳性细胞数也在缺血半暗带区明显升高,CIP组与IR组均显著高于sham组,CIP组低于I/R组,差异显著(P<0.05)。CIP组和I/R组RAGE、TLR4 mRNA表达均显著高于sham组(P<0.05),均于1 d时达高峰,随再灌注时间的延长两者表达逐渐下降,CIP组较I/R组的表达均明显降低(P<0.05)。因此,脑缺血再灌注损伤可激活炎症介质,产生级联反应,CIP可使大脑产生缺血耐受,明显减轻炎症反应,并减小脑梗死体积,RAGE、TLR4在缺血损伤过程中表达上调,脑缺血耐受机制可能与下调缺血再灌注损伤时RAGE和TLR4的表达有关。