载rhBMP-2活性肽微球及支架材料研究

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为克服骨形态发生蛋白的半衰期短、易被代谢和价格昂贵等问题,把这类因子加载到缓释型载体中显得非常必要。本论文中,为了实现重组骨形态发生蛋白-2多肽(rhBMP-2多肽,简称Peptide-24)的缓释,先后制备和研究了乳酸乙醇酸共聚物微球(简称PLGA微球)、PLGA/壳聚糖复式微球(简称PLGA/CS微球)及载有PLGA微球的壳聚糖支架材料。用复乳化法制备了载Peptide-24的PLGA微球。释放液中Peptide-24的分析表明,释放后的Peptide-24保持完好的二级结构和初始的分子量,且在细胞培养实验中表现出良好的生物活性。制备了复式结构的PLGA/CS微球。PLGA/CS微球的粒径分布、微观形貌、载药率、表面Zeta电位和理化特性与PLGA微球进行对照表征。监测了在PBS中孵育时,模型蛋白的释放和微球基体的降解规律。结果证明,壳聚糖外壳既能减缓早期蛋白的突释。又能延长释放周期,还能避免PLGA降解引起的酸性问题。分两次投递活性多肽(Peptide-24)制备了系列的PLGA/CS微球。释放结果表明,与壳聚糖微球相比,PLGA/CS微球表现出良好的线形释放和可控释放的模式,释放的Peptide-24保持着它的初始二级结构和分子量。降解实验结果表明微球基体分子量的变化与基体形貌变化相一致,并使环境中pH维持在初始值。此外,两种不同的骨修复因子(rhBMP-2,Peptide-24)分别投递到PLGA/CS微球的内外两层。在大鼠股骨髁修复实验中,同时加载rhBMP-2和Peptide-24的复式微球由于双因子之间的协同效应,其诱导成骨的能力更加突出。PLGA/CS微球是一种新颖的双因子缓释载体,对于研究双因子缓释时的协同效应具有重要意义。载Peptide-24的PLGA微球与另一种活性的纳米羟基磷灰石/胶原复合物(nHAC)一起复合到交联的壳聚糖基体中,制备了PLGA微球/nHAC/壳聚糖支架。该支架有良好的均一性、高的孔隙率、优异的亲水性和力学强度。动物实验证实,PLGA微球/nHAC/壳聚糖支架材料具有显著的促进大鼠5mm全层颅骨缺损修复的能力。
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