论文部分内容阅读
卵巢癌是妇科三大癌症之一，致死率一直居高不下。饮用红茶能降低罹患卵巢癌的风险。红茶是世界上消费量最大的茶类。茶黄素是一类具有多种生理活性的红茶多酚。近年来，茶黄素的抗癌活性成为了研究热点。但是，多数现有研究以茶黄素混合物为实验材料，对茶黄素抗癌机理的研究并不完全，且有关茶黄素抑制卵巢癌的作用及机理的报道很少。本研究从四种茶黄素单体中筛选出一种用于评估其抗卵巢癌活性。主要研究内容如下: 1、比较了四种茶黄素单体对卵巢癌细胞OVCAR-3和A2780/CP70增殖、诱导HUVEC管腔形成、VEGF分泌、凋亡和Caspase活性的作用。发现四种茶黄素单体对两种卵巢癌细胞均有增殖抑制作用，且在相同浓度下，四种茶黄素单体对卵巢癌细胞的毒性大于对正常细胞IOSE364的毒性。四种茶黄素单体都表现出良好的抗血管生成活性，明显减少癌细胞分泌VEGF。TF2A、TF2B和TF3均能诱导两种卵巢癌细胞凋亡，提高Caspase-3/7、8、9活性。总的来看，TF2A、TF2B和TF3抗卵巢癌效果比较接近，而TF1与前三者的抗癌效果差异较大、抗卵巢癌广谱性较差。鉴于本研究所采用的茶黄素单体分离提纯方法中TF3得率远大于TF2A和TF2B，且在一些红茶中TF3的含量也大于TF2A、TF2B的含量，故选用TF3作为后续实验材料。 2、研究发现TF3可以抑制OVCAR-3细胞诱导的血管生成、鸡胚绒毛尿囊膜血管形成，降低OVCAR-3细胞HIF-1α表达和VEGF分泌。Western blot实验和荧光素酶报告基因实验证实，TF3可通过Akt/mTOR/p70S6K/4E-BP1通路和Akt/c-Myc通路抑制HIF-1α/VEGF通路。Akt抑制剂wortmannin可以增强OVCAR-3细胞对TF3的敏感性，而过表达Akt会降低OVCAR-3细胞对TF3的敏感性。OVCAR-3细胞还能通过Notch-1/c-Myc通路抑制HIF-1α/VEGF通路。Notch抑制剂DAPT会增强OVCAR-3细胞对TF3的敏感性，而过表达NICD会增强OVCAR-3细胞对TF3的耐受性。在本实验中，未发现MAPK通路参与TF3的抗肿瘤血管生成作用。 3、研究发现TF3可以剂量依赖性增加OVCAR-3细胞凋亡，增强Caspase-3/7、8、9活性。Western blot实验显示，TF3非ATM依赖性激活Chk2、上调Bax表达、下调Bcl-xL表达、促进PARP-1裂解，但对p53、Bad、Bcl-2、Mcl-1、Apaf-1表达无明显影响。siRNA转染实验证实，TF3通过激活Chk2改变促/抗凋亡Bcl-2蛋白比例、活化Caspase-3/7和9、促进PARP-1裂解，引起内源性凋亡。此外，TF3还能上调OVCAR-3细胞中死亡受体Fas和DR5表达，活化Caspase-8，引起外源性凋亡。 4、研究发现TF3诱导OVCAR-3细胞周期阻滞于G0/G1期，其机理是TF3上调p27，下调CyclinD1、CDK4和p-Rb蛋白水平。 总之，本文从抑制增殖、减少肿瘤血管生成、促进凋亡和诱导周期阻滞的角度对TF3的抗卵巢癌作用进行了评估，首次发现Notch-1、Chk2、p27为TF3的靶点，参与其抗癌作用。本研究拓展了人们对TF3抗癌机理的认识，为TF3可作为一种有潜力的抗癌化合物提供了更多的实验依据。