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实验目的怀孕期间过量饮酒会导致胎儿患酒精综合征(FAS)。然而,酒精暴露导致颅面畸形(FAS的症状之一)的分子机制目前尚不清楚。颅面骨的形成主要来源于颅神经嵴细胞(NCCs)。因此,本课题利用鸡胚和体外外植体作为实验模型,探究乙醇暴露下影响颅神经嵴的发育具体机制。实验方法将鸡胚持续暴露于2%乙醇,14天时通过茜素红骨骼染色观察鸡胚颅面骨骼发育情况。采用鸡胚EC-Culture培养方法,将HH0期鸡胚暴露于2%乙醇,到HH10期(36小时)收获胚胎,观察早期鸡胚的颅神经嵴发育情况,利用原位杂交、reverse transcription polymerase chain reaction(RT-PCR)and Western blot、免疫荧光、RT-qPCR等实验方法,观察暴露于乙醇后的鸡胚颅神经嵴发育过程中关键转录因子的表达情况,以及神经嵴上皮细胞-间质细胞转化(EMT)过程中粘附分子的改变,研究乙醇对鸡胚颅神经嵴发育的影响机制。同时将HH10期鸡胚颅神经管组织离体培养,验证鸡胚在体实验结果。实验结果实验结果表明,暴露于2%乙醇会引起发育中的鸡胚的颅面缺陷(包括顶叶缺损以及上颌骨变短),同时,早期鸡胚颅神经嵴发育受到了明显抑制。免疫荧光染色结果显示,乙醇处理抑制颅神经嵴细胞的特异性标志基因Ap-2ɑ、Pax7和HNK-1的表达。采用免疫荧光双标染色法检测Ap-2ɑ/p HIS3和Ap-2ɑ/c-Caspase3,发现乙醇处理可抑制颅神经嵴细胞的增殖,促进颅神经嵴细胞的凋亡。此外,乙醇处理后,检测神经嵴发育过程中上皮细胞-间质细胞转化过程中粘附分子的表达,结果发现背侧神经上皮层粘连蛋白(Laminin),N-cadherin和Cadherin6B的表达上调,而Cadherin7表达被抑制。原位杂交检测结果也揭示乙醇处理上调了Cadherin6B表达,但参与调控神经嵴发育过程中早期神经板特化基因BMP4,调控神经嵴前体细胞产生的转录因子Msx1,以及直接调控粘附分子的基因slug,FoxD3的表达受收到明显的抑制。实验结论以上实验结果表明,乙醇处理通过影响鸡胚颅神经嵴细胞的增殖和凋亡而干扰头颅NCC的产生。此外,乙醇负面影响了颅神经嵴细胞的分层,EMT过程和神经嵴细胞的迁移,这可能最终导致颅面骨畸形。