背景:胶质瘤是颅内最常见的原发性恶性肿瘤,尤以胶质母细胞瘤(GBM)恶性程度最高。虽然近年来胶质瘤个体化、精准化治疗的普及以及诊治水平的提高,使得胶质母细胞瘤患者的平均生存期从10个月延长到了14个月,但是总的来说患者的预后仍然不佳。虽然在分子靶向治疗方面的研究取得了许多重要成果,但是胶质瘤的潜在分子机制在很大程度上仍然是未知的。因此,揭示胶质瘤发生的分子机制才能更好地制定有效的治疗方法。替莫唑胺(TMZ)是一种DNA烷化剂,它能够通过血脑屏障,是治疗胶质瘤的主要化疗药物。微小RNA(mi RNA)是一类长度为18-25个核苷酸的、小的、高度保守的非编码RNA分子,研究表明它们能影响包含神经胶质瘤在内的许多肿瘤的发生和发展。前期实验结果显示mi R-141-3p在临床胶质瘤样本中是高表达的并且随着WHO分级增高而增高。进一步实验发现mi R-141-3p能促进胶质瘤细胞的增殖和耐药,但是具体机制尚不清楚。p53是一种最早研究的肿瘤抑制基因,大量研究表明它与胶质瘤等许多肿瘤的发生、发展有关。最近的研究结果显示p53表达量的下降会增强胶质瘤细胞对替莫唑胺的耐药性。于是我们设想mi R-141-3p是不是通过靶向p53,从而影响胶质瘤细胞的增殖和耐药。实验结果验证了mi R-141-3p通过靶向p53导致胶质瘤细胞的增殖和耐药。于是我们大胆猜想,mi R-141-3p可能是治疗胶质瘤的关键靶点。目的:1.研究mi R-141-3p在胶质瘤中的表达以及对胶质瘤细胞的增殖和耐药的影响;2.探索mi R-141-3p与p53的关系,即mi R-141-3p是否通过靶向p53影响胶质瘤细胞的增殖和耐药。材料与方法:1.从癌症基因组图谱(TCGA)和中国胶质瘤基因组图谱(CGGA)数据库下载胶质瘤患者、正常对照组的m RNA表达数据和胶质瘤患者的生存数据。2.使用Takara逆转录试剂和SYBR Green PCR Master Mix进行荧光定量PCR反应。培养不同的神经胶质瘤细胞系,通过荧光定量PCR分析mi R-141-3p在各个细胞系的表达水平。3.通过单克隆、CCK8、Ed U实验测定转染了anti-mi R-141-3p的U87、A172、有TMZ抗性的U87和A172细胞,以及过表达mi R-141-3p和用p53质粒处理的U87、A172细胞的增殖能力。并通过流式细胞实验来测定上述实验细胞中的细胞周期和细胞凋亡。通过Western Blot(蛋白免疫印迹实验)分析相对应的cyclin B1、cyclin E1、CDK2和cleaved caspase 3蛋白的表达量。4.通过靶基因预测软件和荧光素酶报告基因实验检测证实p53是mi R-141-3p的靶基因。采用荧光定量PCR和蛋白免疫印迹实验对5个正常脑组织(NBT)和27例人脑胶质瘤组织包括7个低级别胶质瘤组织和20个高级别胶质瘤组织中mi R-141-3p和p53的表达量及其相关性进行分析。通过蛋白免疫印迹实验分析p53及其下游蛋白p21和bax的表达量。5.转染anti-mi R-141-3p进入带有荧光素酶的U87胶质瘤细胞后,对裸鼠进行颅内种植。肿瘤形成后,TMZ治疗组的裸鼠接受TMZ口服灌胃(每天100μM,每周5天,持续3个周期),治疗开始后,每隔7天时间通过活体动物生物发光成像系统监测肿瘤生长。6.用p53,Ki67和cleaved caspase 3的抗体针对裸鼠原位种植后取下的肿瘤组织进行免疫组织化学染色。研究结果:1.通过数据库和临床样本分析发现mi R-141-3p在人脑胶质瘤组织中是高表达的并且随着WHO级别的增高而增高,能影响胶质母细胞瘤患者的预后;2.增殖和耐药相关的体外功能实验和动物实验证实mi R-141-3p促进胶质瘤细胞的增殖和耐药;3.靶基因预测软件、荧光素酶报告基因实验和蛋白免疫印迹实验证实p53是mi R-141-3p的靶基因;4.回复实验结果证实mi R-141-3p通过靶向p53影响胶质瘤细胞的增殖和耐药。研究结论:1.Micro RNA-141-3p在人脑胶质瘤组织中是高表达的并且随着WHO级别的增高而增高。2.Micro RNA-141-3p的表达水平与p53的表达水平呈负相关并且能抑制p53下游蛋白bax和p21的表达;2.Micro RNA-141-3p通过直接靶向p53促进神经胶质瘤细胞增殖和替莫唑胺耐药。