通路抑制剂LY294002、PD98059对SDF-1介导的卵巢癌细胞增殖和侵袭能力的影响

被引量 : 0次 | 上传用户:foxylxq
下载到本地 , 更方便阅读
声明 : 本文档内容版权归属内容提供方 , 如果您对本文有版权争议 , 可与客服联系进行内容授权或下架
论文部分内容阅读
背景与目的基质衍生因子-1(stromalcell-derived factorl,SDF-1)是由骨髓基质细胞及其他相关的间皮细胞和上皮细胞分泌的一种趋化蛋白,系统命名为CXCL12。趋化因子受体4(chemokine receptor4,CXCR4)是SDF-1的主要受体。SDF-1与CXCR4特异性结合后形成的SDF-1/CXCR4生物轴广泛参与体内多种病理生理过程,研究证实SDF-1/CXCR4与肿瘤的增殖、浸润和转移密切相关。SDF-1与CXCR4的结构和相互作用机制是发挥其病理、生理功能的基础。尽管有报道称SDF-1、CXCR4在卵巢癌组织及细胞中呈高表达,SDF-1可促进卵巢癌细胞的增殖和侵袭、迁移能力,但关于SDF-1/CXCR4对卵巢癌增殖和侵袭能力影响的作用机制尚不清楚。信号通路的激活是癌发生的早期事件,磷脂酰肌醇3激酶/蛋白激酶B(PI3K/Akt)信号途径是细胞内重要的信号传导通路;分裂原活化抑制剂/蛋白激酶(MEK/ERK)信号途径是重要的细胞外信号传导通路。本实验主要研究SDF-1对卵巢癌细胞的增殖、侵袭能力的促进作用是否能被MEK抑制剂PD98059、Akt抑制剂LY294002所阻断,从而探讨SDF-1/CXCR4生物轴与信号通路MEK/ERK及PI3K/AKT信号通路的关系。方法1.细胞培养卵巢癌细胞系SKOV3,应用含12%胎牛血清的RPMI-1640培养基培养,置于5%CO2、37℃、饱和湿度的细胞培养箱中孵育。2.采用细胞免疫化学检测SDF-1作用不同时间以及不同作用浓度,卵巢癌细胞表达磷酸化AKT(P-AKT)和ERK(P-ERK)水平的变化;3.采用四甲基亚唑蓝(MTT)法检测卵巢癌SKOV3细胞在100ng/ml SDF-1、10μg/ml CXCR4中和抗体、1μg/ml CXCR4抑制剂AMD3100、50μmol/L LY294002、50μmol/L PD98059作用下细胞增殖能力的变化。4.采用Transwell细胞侵袭实验法检测卵巢癌SKOV3细胞在100ng/ml SDF-1、10μg/ml CXCR4中和抗体、1μg/ml CXCR4抑制剂AMD3100、50μmol/L LY294002、50μmol/L PD98059作用下细胞侵袭能力的变化。5.采用SPSS16.0统计软件处理数据,定性资料采用等级资料秩和检验;定量资料以x±s表示,方差齐性检验,多组间的比较采用方差分析,多个样本均数的两两比较采用LSD-t检验。检验水准=0.05,以P<0.05为差异具有统计学意义。结果1.磷酸化的ERK蛋白主要表达于SKOV3细胞的胞质和胞核中,以胞核表达为主,磷酸化的Akt主要表达于卵巢癌细胞的胞质中,镜下可见棕黄色颗粒。根据阳性细胞数及细胞染色程度表示蛋白表达水平,随着100ng/mlSDF-1作用时间的延长,棕黄色颗粒由浅至深,差异具有统计学意义(P-ERK:2=24.011,P=0.000;P-AKT:2=16.408,P=0.003);30分钟组与60分钟组相互比较,细胞内棕黄色颗粒的染色程度基本一致,无明显差异(P-AKT:2=4.835,P=0.089;P-ERK:2=1.725,P=0.422)。可见100ng/mlSDF-1的最佳作用时间为30分钟;当作用时间为30分钟时,随SDF-1浓度的增加,P-ERK、P-Akt蛋白的染色程度也随之加重,差异具有统计学意义(P-ERK:2=8.467,P=0.015;P-AKT:2=8.345,P=0.015)。2.与无血清对照相比,SDF-1组的吸光度值(OD492)明显较高(d=-0.12378,P=0.007);但同时加入10μg/mlCXCR4中和抗体(d=0.12956,P=0.005)、1μg/mlCXCR4抑制剂AMD3100后(d=0.13900,P=0.003),与SDF-1组相比,吸光度值(OD492)则无明显升高;此外,在SDF-1中同时加入50μmol/L PD98059(d=0.11594,P=0.014)、50μmol/L LY294002(d=0.10978,P=0.025)后,与SDF-1组相比,吸光度值(OD492)亦无明显升高。3.与无血清对照相比,SDF-1组的迁移细胞数(平均70.2±9.22316个)明显多于无血清对照组(平均23.1±1.64007个),差异具有统计学意义(d=-47.1,P=0.000);但同时加入10μg/mlCXCR4中和抗体(平均27.7±4.73873个)、1μg/mlCXCR4抑制剂AMD3100(平均30.3±6.25478个)后,细胞穿透数目无明显增多,与SDF-1组相比差异具有统计学意义;此外,同时加入50μmol/L PD98059(平均20.7±4.34741个)、50μmol/L LY294002(平均24.3±3.59166个)后,细胞穿透数目亦无明显增多,与SDF-1组相比差异具有统计学意义。结论SDF-1可促进卵巢癌细胞的增殖和侵袭能力,但这种作用可被MEK抑制剂PD98059、Akt抑制剂LY294002所阻断和拮抗,因此SDF-1/CXCR4可能通过MEK/ERK信号转导通路、PI3K/Akt信号通路发挥作用。
其他文献
从20世纪70年代以来,全世界人得目光被迫逐渐地聚焦在生态问题上。生态危机的出现引起了全球范围内人们的广泛关注,生态问题的恶化成为了世界性的重大话题。人类在与自然的不和
中国民族历史悠久,中国文化博大精深。围棋作为中国传统文化的一部分,它随着中华文明的历史发展而来,它是中华民族流传下来的瑰宝。在几千年的发展过程中深受儒家、道家、天道自
目的:分析达英-35治疗功能性子宫出血的效果。方法:选取本院2013年1月至2017年2月接诊的功能性子宫出血患者60例,将其按照数字随机表法分为研究组和对照组,每组分别30例,研究
托马斯&#183;哈代自幼深受基督教文化的熏陶,他的小说中有着清晰的基督教文化的印记。对他的小说的理解,若脱离了基督教和《圣经》的背景,则会是不准确和不深入的。本文对哈代代
网络不但为人们提供了高效的工作方式,海量的信息资源,还为人们创造了无障碍交流的虚拟世界。网络技术的发展,使人际交往的范围超出了物理时空的限制,也对传统社会中道德体系
从猪场总体规划、饲养管理和疾病防治、未来养猪产业发展3个方面,具体阐述了猪场如何建立安全的养殖模式。
摘要:中国是世界上自然灾害最严重的国家之一,灾害的多发性决定了灾害应急决策及救援研究的必要性。如何在最佳救援时间内集结全面的灾害实时信息,协调多个部门工作,高效有序
CFO制度起源于西方国家,其创立是为了解决委托代理问题,发挥财务监督职能。从二十世纪末以来,随着全球经济的快速增长,CFO的职能有了新的发展。CFO不仅需要平衡公司股东与经
目的研究冠心病持续性房颤患者血清C反应蛋白(CRP)意义及与心功能的关系。方法选取2016年1月~2018年6月收治的冠心病持续性房颤患者(106例)作为观察组,选取同期于接受健康体
摘要:软件测试是保证软件质量的重要手段,在软件的开发及维护过程有十分重要的作用。图形用户界面(Graphical User Interface,简称GUI)由于它简便的操作和较好的用户使用感受,