狂犬病（Rabies）是由狂犬病病毒（Rabies virus,RABV）引起的人兽共患病。RABV是典型的嗜神经性病毒,侵入中枢神经系统后,引起明显的神经系统症状,并导致宿主死亡。近年来,我国RABV毒株的多样性明显增加,出现了北极相关群、世界群草原型和印度次大陆群等新的进化分支,不同毒株的生物学特征存在一定差异。目前对流行时间较长的亚洲群RABV的毒力检测和生物学特性的研究较多,但是目前尚没有对新出现毒株的毒力等生物学特性研究,而且现有狂犬病疫苗对新出现毒株的免疫保护效果尚不清楚。本研究对新进化群毒株的基因序列特征、感染与致病性等生物学特性以及商品化的人用狂犬病疫苗对RABV代表毒株是否具备交叉免疫保护能力进行了研究。主要研究内容包括:1.狂犬病病毒街毒株全基因组序列测定与分析使用Illimina Novaseq 6000 Hi Seq X Ten平台对实验室现有50株毒株进行测序,每个毒株获得6G测序数据,用DNAStar软件拼接,得到全基因组序列,长度为11875-12084bp。系统进化分析将50株毒株分为3个进化群,包括亚洲群23株、世界群草原型亚群24株、北极相关群3株。明确了上述毒株基因组特征,5个结构基因中有个别毒株的某些抗原表位区、淋巴细胞主要表位、甘氨酸序列、高变区等发生氨基酸突变,但在毒力决定位点均无突变。RABV的5个结构基因的核苷酸替换率由低到高分别为N、L、M、G和P;RABV的TMRCA平均值估计在1160-1362年。测序获得50株RABV毒株的准种序列,其中有12株毒株发生准种突变,其中亚洲群6株,世界群草原型4株、北极相关群2株,变异位点主要集中在L基因。2.不同进化群街毒株对小鼠感染特性的分析为了评价不同进化群街毒株感染小鼠的毒力,本研究挑选3株不同进化群、不同宿主来源街毒株GDMMD16、NMALSF01、Nei Meng927A进行小鼠毒力评价分析,均以标准攻击毒株CVS-11作为参考,每株毒株以10 LD50攻击青年鼠各12只,3株街毒株感染的小鼠在发病后均出现体重下降、被毛褶皱、后肢伸展,瘫痪的狂犬病临床症状,而GDMMD16组小鼠部分表现为精神异常兴奋的狂躁型临床症状,NMALSF01和Nei Meng927A组则表现为与CVS-11相同的麻痹型临床症状;在旷场实验中,4组均表现出焦虑和运动能力下降的症状,NMALSF01组表现最明显;在转棒实验中,4组均出现运动能力下降的表现,NMALSF01组表现最明显;对死亡小鼠的脑组织和脊髓的组织病理观察结果显示,脑组织和脊髓均出现不同程度的神经元坏死和淋巴细胞浸润的现象,其中CVS-11组脑和脊髓均出现神经元坏死和淋巴细胞浸润的现象,而GDMMD16组和NMALSF01组在海马体中未发现病变,Nei Meng927A组在小脑中未发现病变;每组毒株的3只死亡小鼠的心、肝、脾、肺、肾等器官中未检测到RABV。3.狂犬病疫苗免疫血清对不同街毒株的中和能力分析为了评价狂犬病疫苗对不同毒株的交叉免疫保护能力,本研究通过制备3株街毒株GDMMD16、NMALSF01和Nei Meng927A的细胞毒,分别对免疫过狂犬病疫苗的23份人血清、22份犬血清、1份狐狸血清和1份貉血清进行改进过的狂犬病荧光抗体病毒中和实验（m FAVN）,结果发现除了狐狸血清对GDMMD16街毒株无保护效力外,其余所有血清对GDMMD16、NMALSF01和Nei Meng927A街毒株的中和效价均高于WHO推荐的标准（0.5 IU/m L）,可以表明商品化的人用及兽用灭活狂犬病疫苗对这3株街毒株具有保护能力。