木质素降解酶对三苯甲烷类染料及竹碱木素降解的初步研究

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三苯甲烷类染料和木质素都是芳香族类化合物,这类化合物难以自然降解,在自然界中的不断积累,造成了严重的环境污染。在自然界中,白腐菌能依靠分泌的以木质素降解酶(木素过氧化物酶、锰过氧化物酶及漆酶)为主的特殊酶系对这类污染物进行有效的降解,因此,白腐菌及其木质素降解酶对芳香族类污染物的降解已经成为研究的热点。本论文分别以Phanerochaete chrysosporium和Pleurotus ostreatus菌株所分泌锰过氧化物酶(Mnp)及漆酶(Lac)为研究对象,初步研究了Mnp、Lac对三苯甲烷类染料和竹碱木素的脱色降解,同时初步探讨了两种木质素降解酶在一降解体系中的协同作用。在研究初期,本文对白腐菌菌株的产酶条件以及温度、pH对酶活性的影响进行了研究。在产酶条件的研究中,Phanerochaete chrysosporium菌株在选择性产酶培养基中摇床培养,第10天时Mnp有最大酶活4.22 U/mL,增加接种量后,Mnp的酶活能提高到6.51 U/mL;Pleurotus ostreatus菌株在土豆汁培养基中静置培养,第12天时Lac能达到最大酶活4.56 U/mL,增加接种量后,Lac的最大酶活能达到7.91 U/mL。在温度、pH对酶活性的影响研究中,实验结果表明,Mnp的最适温度为40℃,最适pH为4.0;Lac的最适温度为50℃,最适pH为6.0。在Mnp及Lac对三苯甲烷类染料的降解脱色研究中,以孔雀石绿(MG)、溴酚蓝(BPB)、结晶紫(CV)三种染料为实验材料,对比研究Mnp、Lac降解体系中三苯甲烷类染料的降解,以及两种酶在染料降解过程中的协同作用。实验结果表明,Mnp和Lac是能够对三苯甲烷类染料进行降解的酶类;两种木质素降解酶对三苯甲烷类染料的脱色降解难易程度受其分子结构的影响;以及Mnp、Lac共同降解三苯甲烷染时,两种木质素降解酶之间存在协同作用。以纯化的竹材碱木素为实验材料,研究了两种木质素降解酶的降解体系对木质素的降解。实验结果表明,以Phanerochaete chrysosporium和Pleurotus ostreatus菌株的发酵液配制的降解体系均对碱木素的去除作用,其中Pleurotus ostreatus发酵液配制的Lac降解体系对碱木素有更好的去除作用;通过紫外光谱检测和GC-MS检测,证明了两种木质素降解酶的降解体系对碱木素的去除作用包括了絮凝作用和降解作用。
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