休哈塔假丝酵母对抑制物响应分子机制的探索

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本文针对木质纤维原料水解液乙醇发酵抑制物的关键性技术瓶颈,以木糖代谢模式菌株休哈塔假丝酵母Candida shehatae NL12和热带假丝酵母Candida tropicalis(CBS94)为实验材料,基于高通量转录组测序技术建立了酵母糖代谢和乙醇发酵的转录谱。通过转录谱测序数据的比对分析与挖掘,筛选出酵母细胞中共有的木糖代谢及乙醇发酵主要功能蛋白及酶基因。在此基础上,以C. shehatae为研究对象通过RQ-PCR对关键性抑制物甲酸的响应基因进行了验证,并且对它们的转录动力学及分子调控进行了研究和探索。研究结果表明,甲酸对C. shehatae葡萄糖和木糖的乙醇发酵抑制强度存在着明显的差异,其中木糖乙醇发酵的半致死抑制和完全抑制浓度分别为8.0g/L和10.0g/L。通过对C.shehatae细胞454高通量转录组测序数据的分析,找出了42个参与葡萄糖代谢、木糖代谢和乙醇发酵代谢途径相关联的功能基因。将其与C. tropicalis细胞EST文库测序结果的对比解析,确定了酵母细胞内普遍存在的与木糖发酵产乙醇关联的16个基因,其中ALDH、ADH受葡萄糖的高效诱导,PDH、TKL、PYK、PDC、XR、XDH、HAGT基因受木糖的高效诱导。对糖类乙醇发酵代谢途径中的42个基因进行不同浓度抑制物条件下RQ-PCR检测,确定出其中15个基因为甲酸抑制物的关键性响应基因:XDH、ACS、RKI、TAL、GND1、TKL、ZWF1、XR、PDH、PDC、ADH、GLK、MDH、PFK和ALDH。半致死浓度甲酸抑制条件下各基因转录动力学实验结果显示,在参与木糖代谢和乙醇发酵的关键酶基因中,XR和PDH基因对甲酸抑制作用表现出持续稳定的响应,XDH、ADH和PDC基因的响应作用逐渐衰减,GPD基因的响应作用为逐渐增强,而GND1、ALDH和ZWF1基因的响应作用表现为S波型规律。
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