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细胞膜表面的受体识别刺激源,将刺激信号传导进入细胞对于细胞的活化至关重要,目前乳腺上皮细胞（MECs）胞外LPS-TLR4炎症信号途径的研究报道甚少,LPS刺激MECs的条件如何,MECs是否存在CD14、MD-2,它们俩在MECs胞外LPS-TLR4炎症信号途径中作用如何,中药以胞外LPS-TLR4炎症信号为靶向的抗炎机制如何,这些都急需解决。为此,本课题体外培养小鼠MECs,采用噻唑蓝（MTT）法检测LPS对小鼠MECs的IC50值和LPS刺激细胞的时间,通过荧光素标记的LPS刺激细胞,采用流式细胞术检测不同浓度LPS在不同刺激时间与细胞的结合率筛选刺激条件;设计CD14、MD-2引物,应用PCR技术检测小鼠MECs上CD14、MD-2 mRNA表达,采用流式细胞术检测细胞上CD14、MD-2蛋白表达;采用siRNA转染技术对培养细胞CD14、MD-2进行单独或同时转染,采用流式细胞术检测LPS与细胞结合率;采用ELISA方法检测CD14、MD-2单独或同时转染前后LPS介导细胞分泌炎症因子TNF-α、IL-6及IL-1β的量;qPCR法检测金英黄归汤及有效成分对小鼠MECs上LPS-TLR4炎症信号途径相关因子CD14、MD-2mRNA表达的影响。结果显示:（1）随着LPS（1 μg/mL起）刺激浓度的增加,细胞OD490nm值逐渐低于空白组,50μg/mLLPS的OD490nm值极显著低于空白组（P<0.01）,LPS作用于细胞IC50为76.83μg/mL。与体外培养1h的细胞相比,培养6～48h的LPS（10 μg/mL）组和相应空白对照组OD490nm值都有极显著性上升（P<0.01）,且呈对数增长,LPS组与空白对照组之间没有差异（P>0.05）。当LPS的浓度≤5μg/mL时,细胞与LPS的结合率极快增长,当5～20μg/mL之后,细胞与LPS的结合率增长缓慢,呈现饱和状态。同样,当LPS刺激细胞≤6 h时,细胞与LPS的结合率极快增长,当6～24 h之后,细胞与LPS的结合率增长缓慢,也呈现稳定的平台期。（2）MECs上不仅有CD14、MD-2mRNA的表达,且在细胞膜上有一定量的MD-2蛋白表达,而CD14蛋白微量表达。（3）选用获得CD14、MD-2 siRNA转染片段,将CD14、MD-2基因单独或同时沉默后,LPS与小鼠MECs的结合率都极显著抑制（P<0.01）,结合率分别下降了 7.88%、3.00%、13.41%,同LPS组相比较都显著或极显著下调LPS介导下细胞分泌TNF-α、IL-6及IL-1β的量（P<0.05,P<0.01）。（4）金英黄归汤低剂量组（40μg·mL-1）、金英黄归汤中剂量组（400 μg·mL-1）、金英黄归汤高剂量组（4000 μg·mL-1）、绿原酸低剂量（20μg·mL-1）、绿原酸中剂量组（200μg·mL-1）、绿原酸高剂量组（2000μg·mL-1）、连翘酯苷A低剂量（20μg·mL-1）、连翘酯苷A中剂量组（200μg·mL-1）、连翘酯苷A高剂量组（2000μg·mL-1）都能显著或极显著下调LPS介导下CD14和MD-2的mRNA表达（P<0.05,P<0.01）。结果提示:低浓度LPS对细胞生长有一定的促进作用,但随着LPS浓度的增加毒性作用越来越强。LPS刺激MECs的最适条件为浓度5～10 μg/mL,刺激时间6～12 h时,此时细胞与LPS的结合将达到饱和。MECs有CD14、MD-2的存在,它们是细胞胞外LPS-TLR4炎症信号途径重要基因。金英黄归汤及其主要成分都可以下调LPS介导的小鼠MECs的CD14、MD-2的mRNA的表达,这可能是金英黄归汤的抗炎机制。研究结果明确了 MECs胞外LPS至TLR4信号途径,并从分子水平揭示中药对其的作用机制,解决中药作用机制不明确的问题,为中药治疗炎症提供理论数据。