论文部分内容阅读
目的：癌细胞对化疗药物产生耐药性是卵巢癌治疗过程中出现的主要问题之一。这促使研究者不断地开发更有效同时副作用更少的新的抗癌药物。而Triapine是最近新合成的一种化学制剂，具有很强的核糖核酸还原酶抑制作用，通过抑制DNA的合成与修复来发挥抗肿瘤的作用。许多研究已表明Triapine具有广谱的抗肿瘤活性并正进行临床Ⅰ期试验。本研究的主要目的在于确定Triapine对耐药的卵巢癌细胞生长是否具有抑制作用以及相应机制的初步探讨。 方法：本研究中共有五个细胞系。其中三个（Cp70，A2780，SKOV3）来自NIH。另外两个（R182及R179）为耶鲁大学妇产科生殖免疫实验室利用细胞原代培养技术从上皮性卵巢癌病人的腹水中分离癌细胞所建立。这些细胞系在先前的研究中已被确定或者对传统的化疗药物paclitaxel（R182，R179，A2780）耐药，或者对卡铂carboplatin（CP70，SKOV3，R179和R182）耐药。用10倍稀释的不同浓度的Triapine（0.1μM-100μM）处理这些细胞48小时，细胞存活率用Celltiter96测定，并通过Hoechst染色观察凋亡细胞的细胞核形态特征。为了明确Triapine诱导凋亡信号通路的特征，在用Triapine处理癌细胞的同时，加或不加caspase-8抑制剂或caspase-9抑制剂，用Caspase-GloTM评估法检测caspases的活性，Western Blot检测凋亡通路中凋亡蛋白及相关因子的变化。 结果：（1）所有用Triapine处理的卵巢癌细胞的存活率均呈剂量依赖性下降。对大部分细胞系来说Triapine的半数致死量小于10μM；（2）Hoechst染色显示在发生凋亡的细胞中出现细胞核收缩，染色质浓缩及碎裂;（3）Triapine处理癌细胞48小时后，easpase一8，一9，一3的活性分别至少提高了6，8，5倍;（4）Western证实在Triapine处理后的癌细胞，Bid、Bax和细胞凋亡的抑制因子Xiap被激活，但Bol一2未发生变化;（5） Tri即ine诱导的卵巢癌细胞凋亡依赖于casPase一8的激活，且经Bid和Bax通过线粒体通路得到放大。结论:（1）实验结果显示TriaPine能有效地杀死耐药的卵巢癌细胞;（2）TriaPine通过诱导细胞凋亡导致上皮性卵巢癌细胞死亡;（3） Bax，casPase一9的激活及xiaP的失活提示依赖线粒体的凋亡通路参与了癌细胞凋亡，这对发展新的卵巢癌联合治疗方法提供了新的途径。