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猪圆环病毒2型(Porcine circovurus type 2,PCV2)是引起猪断奶后多系统衰竭综合征等相关疾病的重要病原。PCV2的ORF2基因不仅是其主要结构蛋白的编码基因，而且也是区分PCV1和PCV2的重要区域，其编码蛋白具有良好的抗原性。本研究利用PCR技术扩增出PCV2BF株ORF2基因，并进行了分子克隆，成功实现了ORF2基因在大肠杆菌中的表达，对表达的重组蛋白进行了初步纯化，利用纯化的重组蛋白初步建立了检测PCV2抗体的ELISA方法。采用PCR技术对12个规模化猪场猪断奶后多系统衰竭综合征发病猪群进行了PCV2检测，完成6株PCV2分离毒株的全基因组序列测定与分析。 1．参照GenBank发表的PCV2BF株基因序列，设计合成一对引物，对PCV2BF株ORF2基因进行PCR扩增，产物经琼脂糖凝胶电泳分析，呈现一条约720 bp的特异条带，将其回收后克隆到pGEM T-Easy载体。根据基因分析，设计一对带有酶切位点的引物，从克隆的pGEM T-ORF2重组质粒扩增出大小为593 bp的ORF2基因片段，然后克隆到表达载体pET-32a中，经XhoI和BamHI酶切鉴定，得到阳性重组表达质粒pET-ORF2。 2．将重组质粒pET-ORF2转化到表达宿主菌BL21(DE3)中，经终浓度为2mmol／L的IPTG诱导，高效表达了ORF2基因编码的结构蛋白，重组蛋白表达量占菌体蛋白量的20％。经Western-Blot检测表明，表达的重组蛋白能够被PCV2阳性血清所识别，具有良好的抗原性。 3．利用表达的重组融合蛋白作为抗原，建立了检测PCV2抗体的间接ELISA方法，并对ELISA的反应条件进行了摸索，确定了抗原的最适包被浓度为5μg／ml，最适包被条件为37℃1 h加4℃过夜，检测血清稀释度为1∶40，HRP-兔抗猪IgG的最适工作浓度为1∶400。包被的重组蛋白不与猪瘟、猪伪狂犬病、猪日本乙型脑炎、猪繁殖与呼吸综合征病毒的阳性血清发生交叉反应，表明建立的ELISA诊断方法具有良好的特异性。间接ELISA方法的建立为我国进行PCV2的诊断与监测以及血清学调查提供了一种技术手段。 4．采用PCR技术对我国北京、天津、山东、广东、深圳、山西等地12个规模化猪场PCV2感染发病猪群进行了PCV2检测，结果表明，从发病猪和死亡猪组织中PCV2的阳性检出率为96％，说明PCV2感染在我国规模化猪场已相当严重。从发病猪组织中分离出6株PCV2，进行了全基因组序列测定，结果表明，深圳分离株(SZ株)的基因组全长为1768 bp，其余分离株的基因组全长均为1767 bp。与国、内外分离毒株的全基因组序列比较发现，我国PCV2分离株同欧、美分离株同源性很高。