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该论文研究了大蒜SOD分离纯化的方法,探讨了氯仿-乙醇沉淀、热变性、等电点沉淀、盐析以及丙酮沉淀等制备方法,结果表明:热变性法能有效的除去杂蛋白,酶活收率也很高,是一种简便、高效的纯化方法;氯仿-乙醇沉淀可以较好的去除杂蛋白,效果和热变性法相当,但氯仿有较大毒性;等电点沉淀法纯化效果不佳;盐析法需要消耗大量的盐,不能回收利用;丙酮沉淀法可以起到很好的纯化和浓缩作用,酶液中残留的丙酮可以通过低温冻干除去,是一种高效的纯化手段.确定了"二次提取→热处理→丙酮二级沉淀→-20℃冻干→少量PBS溶解"的SOD粗品制备方案.大蒜SOD的精制采用金属螯合层析法,层析介质选用改性以后的壳聚糖.天然壳聚糖易溶于酸性条件,选用戊二醛进行交联,交联后的壳聚糖不溶于酸性条件.交联壳聚糖对金属离子的吸附减少,用环氧氯丙烷进行活化,然后与亚氨基二乙酸反应,生成了螯合壳聚糖树脂.该树脂对金属离子具有很好的吸附性能,有较高的强度和稳定性,适于作金属螯合层析的介质.柱层析以20mmol/LpH7.6的PBS,内含50mmol/L咪唑和0.5mol/LNaCl溶液作为洗脱液来洗脱,流速15mL/h,洗脱时有Cu<2+>被洗下,所以要采用特殊的方法装柱.在柱子的上下端分别装入吸附Cu<2+>后和未吸附Cu<2+>的壳聚糖螯合介质,洗脱时洗下的Cu<2+>被柱子下端的树脂吸附.洗脱峰只有一个,收集洗脱液,透析浓缩得到精制的SOD,SDS-PAGE只显示一个条带,达到电泳纯,分子量27,750D,比活力为4,206U/mg,酶活回收率为64.2﹪,纯化倍数为110.4.对精制得到的SOD进行理化性质研究,确定大蒜SOD属于Cu/Zn-SOD,对热和pH有很好的稳定性.该论文采用采用改性后的壳聚糖为介质,利用金属离子螯合层析的方法纯化大蒜SOD.柱层析采用一根柱子装两种介质的方法,很好的解决了金属离子的泄漏问题.最后制备得到的SOD精品达到电泳纯,而从SIGMA公司购买的SOD标准品则有四条电泳条带.该方法成本低、上样量大、产品纯度高,达到了大蒜SOD分离纯化的目的,是大蒜SOD的分离纯化的一种有效途径.