论文部分内容阅读
胶质母细胞瘤（Glioblastoma,GBM）是人类中枢神经系统最常见、最致命的原发性恶性肿瘤,目前的治疗主要依靠手术切除、化疗和放疗。不良的预后反应促使人们去发现更多具有潜在治疗GBM作用的天然产物。大麻酰胺是一种木脂素酰胺,对不同的癌细胞有不同的作用,但对GBM细胞的作用仍不清楚。在本研究中,采用溶剂萃取和各种色谱方法从青风藤（Sinomenium acutum（Thunb.）Rehd.et Wils.）的干燥茎中分离得到大麻酰胺G和大麻酰胺D,用1H-NMR和13C-NMR进行表征结构,用人类胶质母细胞瘤细胞U87和U251细胞研究二者的生物活性。通过CCK-8细胞活力检测分析发现二者均以浓度依赖性方式显著抑制细胞活力并确定了二者EC50。通过Transwell迁移测定法确定经二者处理后细胞迁移被显著阻断,通过DAPI染色,观察到用大麻酰胺处理后细胞核形态发生凋亡变化。通过流式细胞仪检测大麻酰胺D处理前后细胞周期及细胞凋亡变化,同时,为进一步研究大麻酰胺D对GBM细胞周期的影响,通过免疫印迹和real-time PCR分别检测到大麻酰胺D处理后细胞周期蛋白（cyclin）量和细胞周期蛋白及细胞周期蛋白依赖性激酶（CDK）基因转录量发生明显变化。为了探索其作用机制,通过免疫印迹检测了二者处理后细胞蛋白中MAPKs的磷酸化,发现MAPKs的激活与对GBM细胞的抑制作用有关。总之,大麻酰胺G和D为首次从青风藤中分离得到,发现大麻酰胺G可部分激活MAPKs诱导GBM细胞凋亡,大麻酰胺D对人胶质母细胞瘤细胞增殖和迁移的抑制也与MAPKs通路有关。目前,对于微生物代谢产物的研究已经越来越广泛,而微生物来源的代谢产物已成为新型活性天然产物的重要来源。本实验室接续前期对雷公藤（Tripterygium wilfordii Hook.f.）内生真菌的研究,对药用植物雷公藤不同部位的内生真菌进行分离纯化,并进行化学筛选,经筛选发现雷公藤内生真菌CS-O-1代谢产物十分丰富并可能具有免疫抑制活性代谢产物,故对其进行发酵分离,以期得到新型活性先导化合物。本研究对真菌CS-O-1种属进行鉴定,将该菌株鉴定为Talaromyces amestolkiae,编号为CS-O-1。将Talaromyces amestolkiae CS-O-1发酵25 L,发酵物经过滤分离菌丝体和滤液。对菌丝体进行提取及部分分离,通过TLC、硅胶柱色谱、Sephadex LH-20柱色谱、ODS反相柱色谱及HPLC等多种手段分离得到14个化合物,并通过质谱及核磁共振的手段鉴定了7个化合物,包含1个新化合物,命名为chrodrimanin T（1）,和6个已知化合物,分别为烟酰胺（2）、penipyridone D（3）、penipyridone A（4）、3-benzylidene-8,8a-dihydroxy-2-methyl-hexahydro-pyrrolo[1,2-a]pyrazine-1,4-dione（5）及aspergillumarin A（6）、邻苯二甲酸丁基异丁酯（7）。