【摘 要】
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德国小蠊(Blattella germanica)属节肢动物门昆虫纲蜚蠊目,是常见的世界性家居卫生害虫。作为一种病原媒介昆虫,它能够携带多种细菌、病毒及寄生虫卵,导致人类疾病的传播,其分泌物或死亡虫体还能导致人体产生严重的过敏反应。化学杀虫剂大量应用于蟑螂防治,造成德国小蠊的抗药性问题日渐突出,研究高效环保的生物防治杀虫剂显得尤为重要。绿僵菌作为一种常见的真菌制剂,因专一性强、安全性高在防治蟑螂等
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德国小蠊(Blattella germanica)属节肢动物门昆虫纲蜚蠊目,是常见的世界性家居卫生害虫。作为一种病原媒介昆虫,它能够携带多种细菌、病毒及寄生虫卵,导致人类疾病的传播,其分泌物或死亡虫体还能导致人体产生严重的过敏反应。化学杀虫剂大量应用于蟑螂防治,造成德国小蠊的抗药性问题日渐突出,研究高效环保的生物防治杀虫剂显得尤为重要。绿僵菌作为一种常见的真菌制剂,因专一性强、安全性高在防治蟑螂等多种害虫上都得到广泛应用,其主要特征是通过穿透表皮感染昆虫,经口感染途径研究较少,仅在少数昆虫中有报道。由于蟑螂害虫普遍为咀嚼式口器且食性复杂,在蟑螂防治中绿僵菌制剂多以食用毒饵方式应用,绿僵菌经口进入蟑螂消化道中几率很高,肠道内侵染效率的高低直接影响绿僵菌制剂的生防效果,此外,德国小蠊肠道内存在大量的微生物,在保护宿主免受昆虫病原菌入侵方面发挥着重要的作用。因此,对德国小蠊的肠道菌及其抑真菌的相互作用机制进行研究,对于蟑螂的生物防治具有重要的理论意义和应用价值。本论文以实验室培育的德国小蠊和高毒力绿僵菌(Metarhizium anisopliae)为研究对象,从德国小蠊对经口感染绿僵菌的毒力测定、组织切片观察、肠道菌群的组成以及免疫应答等多个层面揭示宿主昆虫的肠道菌抗绿僵菌的感染机制,寻找新的杀虫剂作用靶标或途径,为开发新型高效环保的复配型真菌杀虫饵剂奠定基础。该实验研究主要获得了以下实验结果:1.德国小蠊经口饲喂绿僵菌后的毒力测定首先测定了德国小蠊经口饲喂不同浓度的绿僵菌分生孢子(1×10~5,1×10~6,1×10~7,1×10~8和1×10~9cfu/m L)后15 d内的毒力,发现德国小蠊死亡率高低与分生孢子浓度大小成正比,在最高浓度1×10~9cfu/m L浓度时可达50±2.89%的死亡率,初步证实绿僵菌可经口感染德国小蠊并造成一定的致死率,但显著低于同体积同浓度下体表感染绿僵菌所造成的死亡率(75±5.47%,P0.05)。通过进一步的物种组成分析表明,实验组所含有的独特的14个OUT中,包括Proteobacteria、Firmicutes、Bacteroidetes和Actinobacteria,所包含的菌属例如Perlucidibaca、Ralstonia、Flavobacterium和Granulicatella等多为条件性致病菌。此外,实验共筛选鉴定出肠道中所含的铜绿假单胞菌类和芽孢杆菌类共9株具有抗病原真菌活性菌。4.免疫基因的动态变化德国小蠊经口感染绿僵菌后免疫系统受到挑战,通过荧光定量PCR(q RT-PCR)的方法,检测到相关免疫基因的表达量在感染期7 d内较正常对照发生上调或下调。当绿僵菌经口感染德国小蠊时,Akirin基因在24-72 h的表达量显著上调(P<0.05),而在感染中后期表达量下调后又逐渐上调。Bg TPS基因在宿主摄入绿僵菌后其表达量在48 h时显著下调(P<0.05),在感染后期表达量升高。Bg Po酶的表达量在绿僵菌刺激宿主免疫系统24-72 h后开始显著上调(P<0.05),而在感染后期其表达量显著上调(P<0.05)。Bg Chi基因在侵染初期绿僵菌大量进入消化道肠壁48 h时表达显著升高(P<0.05),在感染中后期,基因表达量显著上调(P<0.05)。Bg Fas 1基因在感染过程中表达量变化总体平稳,只在前期48 h时应对绿僵菌感染表达量显著上调(P<0.05)。CYP5G19基因在抗真菌感染过程中均显著上调(P20,属于增效作用,1组为相加作用(共毒因子=10),各组均未发现拮抗作用,且硼酸在最高浓度(1.6%)与绿僵菌复配时可达到5 d的半数致死时间。实验证明绿僵菌-硼酸具有良好的协同作用,其复配胶饵制剂在德国小蠊防治上具有良好的应用前景。
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