研究目的 核受体是配体依赖性转录因子超家族，核受体的配体作用几乎包含了生物体发育、维持自身稳态、细胞分裂、分化等所有基本生命过程。核受体介导的转录活化机制的研究是近十年生物学研究的热点，继G蛋白耦联受体和离子通道之后，核受体已成为第三大类非酶性治疗靶点。前期工作发现龟版在体内、外可以促进骨髓间充质干细胞(mesenchymalstemcells，MSCs)的增殖并诱导MSCs分化为神经元样细胞，经过较长时间诱导后MSC还可能向成骨方向分化。本研究根据中医“肾藏精，主发育”的理论，在既往研究的基础上，观察龟版提取物对MSCs增殖过程中视黄酸受体(retinoicacidreceptor-α，RARα)、维生素D受体(vitaminDreceptor，VDR)、糖皮质激素受体(glucocorticoidreceptor，GR)、雌激素受体(estrogenreceptor，ER)、甲状腺激素受体(thyroidhormonereceptor-α，TRα)和过氧化物酶体增殖物活化受体(peroxisomeproliferatoractinatedreceptor-δ，PPARδ)表达的影响，从基因水平探讨中药龟版补肾填精的作用机制，进一步筛选龟版提取物和作用药理靶点，为龟版提取物的开发与临床应用提供实验依据。 研究方法 使用密度梯度法分离大鼠MSCs进行培养，经5-溴脱氧尿嘧啶标记和CD44免疫组化染色鉴定后，将体外培养的MSCs分为空白对照组、龟版低剂量组、龟版中剂量组、龟版高剂量组，加入不同浓度的龟版提取物，分别于龟版提取物作用12h、24h、72h、120h后，用免疫组化法和免疫荧光细胞化学法检测MSCs的RARα、VDR、GR、ER、TRα、PPARδ的表达。 研究成果 1.龟版提取物作用的各组MSCs的RARα、VDR表达阳性细胞均显著高于对照组，且呈剂量依赖性；作用24h后RARα表达达峰值，作用72h后VDR表达达峰值。 2.龟版提取物作用的各组MSCs增殖过程中，用免疫组化和免疫荧光方法均检测不到ER、GR、PPARδ、TRα阳性反应细胞。 结论 龟版提取物促进MSCs增殖过程中激活RARα、VDR的表达。RARα、VDR可能是龟板促进MSCs增殖的药理靶点。