窄谱沙门氏菌噬菌体LSE7621的分离、表征及其在食品中的应用

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沙门氏菌是常见的食源性病原体,可引起人畜共患病。而噬菌体可特异性侵染细菌,是一种天然优质抗菌剂,在食品安全控制方面具有巨大潜力。与宽谱噬菌体相比,窄谱噬菌体专一性更强,可以降低微生物群体产生耐药性的风险,对微生物菌群的影响很小。本研究以肠炎沙门氏菌ATCC 13076为宿主,从污水中筛选并分离得到一株窄谱噬菌体,命名为LSE7621,并对LSE7621开展基础分析和应用研究。主要结果如下:(1)生物学特性:LSE7621属于有尾噬菌体目肌尾科,最佳感染复数(Multiplicity of infection,MOI)为0.1,潜伏期约10 min,爆发量约为127 PFU/CFU,裂解期分成2个连续爆发阶段,第一段在30 min(10 min~40 min)内效价从(3.16±0.02)log10 PFU/m L增加到(5.91±0.06)log10 PFU/m L;第二段在60 min(70 min~130 min)内效价从(5.90±0.03)log10 PFU/m L增加到(9.09±0.09)log10 PFU/m L。LSE7621具有良好的p H值稳定性(4.0~11.0)和热稳定性(30℃~50℃),能在4℃和25℃较长时间保藏。(2)基因组学分析:LSE7621是基因组全长为50936 bp的ds DNA噬菌体,GC含量为46.18%(Gen Bank登录号:MK568062)。LSE7621基因组中未发现m RNA和t RNA序列以及耐药基因和毒力因子。LSE7621包含72个推定的开放阅读框(Open reading frames,ORFs),其中30.5%编码功能性蛋白,而69.5%编码假定蛋白,未发现溶原性基因。进化分析显示LSE7621来自一个未分类的噬菌体属。(3)食品安全控制效果:测定LSE7621对沙门氏菌菌悬液的裂解效果,结果显示随着LSE7621浓度的增加,LSE7621对沙门氏菌的控制效果越好,在6 h内LSE7621处理组的细菌数少于对照组。对莴苣叶施用LSE7621时,沙门氏菌的数量在6 h时减少了0.86 log10 CFU/m L(MOI=100)和1.02 log10 CFU/m L(MOI=1)。当在嫩豆腐上施用LSE7621时,沙门氏菌的数量在4 h时减少了3.55 log10 CFU/m L(MOI=100)和1.86log10 CFU/m L(MOI=1)。当在猪肉糜上施用LSE7621(MOI=1或MOI=100)时,LSE7621在6 h内对沙门氏菌没有明显抑制作用,肉的表面积大而不均、内部组织结构复杂、肉类成分的干扰等因素均可能导致噬菌体在肉中控制沙门氏菌的效果不佳。本研究首次系统报道了感染肠炎沙门氏菌的窄谱噬菌体,丰富了窄谱噬菌体的基础研究,并为食源性病原体的控制提供了新的见解。
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