【摘 要】
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目的本实验采用UPLC法同时对乌腺金丝桃药材中四种主要黄酮类成分进行含量测定并对其中主要活性成分槲皮素进行了药代动力学研究,根据药动学参数制备含药血清,探讨其含药血清对损伤细胞模型的保护作用。方法1.UPLC法同时测定乌腺金丝桃中四种黄酮类成分的含量。色谱条件:Shim-pack XR-ODSⅢ 色谱柱（2.0mmi.d.×75 mm,16μm）;柱温为 35℃;样品室温度为4℃;流速为0.4ml
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目的本实验采用UPLC法同时对乌腺金丝桃药材中四种主要黄酮类成分进行含量测定并对其中主要活性成分槲皮素进行了药代动力学研究,根据药动学参数制备含药血清,探讨其含药血清对损伤细胞模型的保护作用。方法1.UPLC法同时测定乌腺金丝桃中四种黄酮类成分的含量。色谱条件:Shim-pack XR-ODSⅢ 色谱柱（2.0mmi.d.×75 mm,16μm）;柱温为 35℃;样品室温度为4℃;流速为0.4ml/min;检测波长为355nm;流动相A:乙腈;流动相B:0.1%甲酸-水（PH2.8）;进样体积:4μl;运行时间:20min。2.乌腺金丝桃中QUE的药代动力学研究:给大鼠灌服乌腺金丝桃提取物后,于不同时间点眼底静脉窦采血。通过β-G酶解,乙酸乙酯萃取法处理血浆样品,采用UPLC法测定血样中QUE的含量,进行药动学分析。3.体外给予100μmol/LH2O2诱导H9C2心肌细胞氧化损伤,以CCK-8法检测含药血清对细胞活性的影响,以流式细胞仪技术检测含药血清对H9C2心肌细胞的凋亡的影响。4.通过酶联免疫法检测各组细胞中超氧化物歧化酶（SOD）、丙二醛（MDA）含量的变化。结果1.乌腺金丝桃中芦丁、槲皮苷、槲皮素、山奈酚分别在7.7～69.3g/ml,1.4～12.6μg/m,15.4～48.6μg/ml,1.6～14.4μg/ml的范围内线性关系良好,精密度、稳定性等均符合要求。芦丁、槲皮苷、槲皮素、山奈酚的含量分别为:0.339mg/g、0.046mg/g、0.159mg/g、0.057mg/g。2.槲皮素在乌腺金丝桃8.4g/kg的给药剂量下主要药动学参数为:t1/2α为0.183 ± 0.008h;t1/2β 为 11.853±0.034h;Tmax 为 0.5h;Cmax 为2.908±0.048mg/L。3.CCK-8结果结果表明:5%含药血清对心肌细胞过氧化无明显保护作用。10%含药血清、20%含药血清、40%含药血清均有降低H2O2对心肌细胞损伤的作用,但是随着含药血清浓度的增加,对细胞的活性产生了一定的抑制作用。因此选用10%含药血清作为最佳浓度。流式细胞技术检测H9C2细胞凋亡,结果显示:10%含药血清可以显著降低氧化损伤心肌细胞凋亡率。4.10%含药血清组可以降低氧化损伤心肌细胞中MDA含量,提高SOD活性。表明乌腺金丝桃含药血清对氧化损伤的心肌细胞有明显的保护作用。
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