论文部分内容阅读
毛细管电泳经历近二十多年的迅速发展,已成为一种重要的现代分离分析方法。毛细管电泳具有分离效率高、分析速度快、样品及试剂消耗少和操作成本低等优点,在生物分子如肽、蛋白质等的分离分析方面有着广阔的应用前景。绪论中简要回顾了毛细管电泳(CE)的兴起与发展,简单介绍了CE的基本原理、分离模式及其CE的特点,较详细地评述了毛细管电泳在改善检出限方面的研究进展。本文采用瞬间-准-等速电泳-毛细管区带电泳法测定了黄鳝(M.albus)血液中的谷胱甘肽和白蛋白。此项研究拓展了毛细管电泳技术在生物分子分析中的应用,为黄鳝相关研究提供了新的分析技术和参考数据。论文主要研究内容如下:
1.黄鳝血浆中谷胱甘肽的测定
1)瞬间-准-等速电泳—毛细管区带电泳法本文首次利用优化的瞬间-准-等速电泳—毛细管区带电泳法(tp-ITP-CZE)紫外检测同时测定了黄鳝血浆中GSH和GSSG。瞬间等速电泳利用乙腈-氯化钠柱上在线预富集的原理改善了方法的检出限,对GSH和GSSG的检出限(S/N=3)分别为0.2μmol/L and 0.05μmol/L。利用苯甲酸作为内标提高了定量测定的精确度。此方法简单、快速、重现性好,可满足黄鳝血液中GSH和GSSG的含量检测。本文对于黄鳝血浆中GSH和GSSG的含量首次进行了报道,发现我国三种不同种黄鳝血浆中GSH和GSSG在幼年黄鳝中的含量高于成年黄鳝;种群1深黄大斑鳝血浆中GSH和GSSG的含量要高于其他两种黄鳝;种群2浅黄细斑鳝与种群3青灰色鳝血浆中GSH和GSSG的含量无显著差异。
2)毛细管区带电泳—荧光检测法毛细管区带电泳—荧光检测法的检出限较瞬间-准-等速电泳—毛细管区带电泳法低约一个数量级,但需要进行衍生反应,而且不能同时测定GSH和GSSG。毛细管区带电泳-荧光检测法检出限的改善是以增长分析时间和增加分析次数为代价,而且需要使用特殊衍生试剂和荧光检测器。两种方法各有其优缺点。
2.采用间隔液的瞬间-准-等速电泳-毛细管区带电泳(tp-ITP-CZE)测定黄鳝血清白蛋白
本文首次提出并通过实验证明在蛋白质样品中引入间隔离子改善瞬间准等速电泳-毛细管区带电泳(tp-ITP-CZE)对蛋白质分离的分离度和检出限。以多聚磷酸盐作为间隔液,利用瞬间准等速电泳-毛细管区带电泳方法在测定了黄鳝血清白蛋白的含量。此方法在其他蛋白质样品的分离测定中具有一定借鉴价值。