瓣状核酸内切酶(Flap Endonuclease 1,FEN1)是核酸酶Rad2超家族的一员,从古细菌到人类中均保守存在,能够广泛参与到DNA代谢途径中。FEN1在DNA复制、重组和修复过程中的重要作用决定了其在维持基因组稳定性中的关键地位,其表达或功能异常会导致生物体内的多个生命过程发生紊乱,对机体产生严重的危害。因此,FEN1在生物体内的表达和功能执行必须受到严格、精确、及时地调控。前期研究显示,翻译后修饰对FEN1蛋白的活性、亚细胞定位及功能稳定性起到重要的调控作用。其中,FEN1的酰基化(乙酰化和琥珀酰化)修饰可能在细胞代谢和DNA损伤修复过程中发挥作用,但其具体的作用机制和生物学效应目前尚不明确。鉴于此,本文主要对FEN1的酰基化修饰在维持细胞基因组稳定性中的功能及作用机制进行了研究。我们通过构建点突变细胞株,鉴定和验证了 FEN1的两个酰基化修饰位点(Lys200和Lys201)。体外酶动力学活性实验显示,与FEN1-WT蛋白相比,其点突变蛋白(K200E和K201E)的EXO活性和GEN活性分别下降了约40%和67%,表明该酰基化修饰可能参与DNA损伤应答和DNA修复过程。细胞的存活率实验表明K200E、K201E突变体对损伤因子(UV、MMC、CPT)的敏感性增加。进一步的体内互作蛋白检测实验发现,与野生型FEN1相比,酰基化缺陷蛋白K200E、K201E与DNA修复相关蛋白和细胞周期相关蛋白的结合能力存在显著差异。我们还使用免疫荧光技术发现了 FEN1的两个酰基化缺陷株K200E、K201E中损伤焦点的聚集增多;细胞周期的检测结果显示,在损伤压力下,K200E和K201E细胞的细胞周期进程停滞在G1期。综上,我们的研究证明了 FEN1的两个关键位点通过酰基化修饰调控其酶切活性,影响FEN1蛋白的DNA损伤修复效率,进而影响细胞周期进程和损伤敏感性的生物学现象及可能作用机制。阐明了 FEN1的酰基化修饰对维持细胞基因组稳定性的重要性。