转AM79-EPSPS耐除草剂基因大豆新材料的创制

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对比国内外大豆产业的发展形势和科学研究形势,可知培育耐除草剂转基因大豆品种,已成为我国实现大豆供需平衡的有效手段。草甘膦作为高效、低毒的广谱性除草剂,一直备受青睐。AM79-EPSPS蛋白不仅具有较高的草甘膦耐受性,而且还保持着与PEP较强的亲和性,能够赋予植物对除草剂草甘膦的耐受性,是培育耐草甘膦转基因作物极佳的选择,目前尚未有在转基因大豆中应用的报导。本研究以天隆一号大豆为材料,从消毒时间、AS浓度、草甘膦浓度和蘸取IBA的时间等方面,探究并建立了高效的转AM79-EPSPS耐除草剂基因大豆转化体系。明确了当种子消毒时间为6-8小时,AS浓度为200μM/L,草甘膦浓度为1OOμM/L,蘸取IBA的时间为30s时,转化效果最好。根据该转化体系开展了一批转化并获得6株阳性苗,采用ELISA技术筛选出了表达量最高的2个植株A6和A8。针对这两个株系,采用RT-PCR技术证明了其后代不同时期不同组织中AM79-EPSPS均有表达;通过Western blot证明了外源目的蛋白在其后代组织中能够正常表达;通过Southern blot验证了目的基因AM79-EPSPS以单拷贝的形式插入A6,A8基因组,且不同世代间整合稳定。本研究还对AM79-EPSPS蛋白特征进行了分析,其与已知的对人和哺乳动物有毒性的过敏原、毒蛋白或抗营养因子无序列相似性,推测其不具有潜在的致敏性、毒性和抗营养作用。
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