目的 通过实时荧光定量PCR方法,定量检测非小细胞肺癌患者外周血中循环肿瘤细胞EpCAM与CK19mRNA的表达水平,分析其表达量对非小细胞肺癌的早期诊断、疗效监测与预后评估等方面的临床应用价值。方法 从非小细胞肺癌细胞株H2009细胞中利用RT-PCR方法获取EpCAM及CK19目的基因片段,分别将EpCAM与pc-DNA3.1载体、CK19与pGEM-T载体连接,构建两目的基因的标准化重组质粒作为荧光定量PCR检测的阳性标准品;将克隆成功的阳性标准品分别按10~7、10~6、10~5、10~4、10~3、10~2、10~1copies梯度稀释,制作荧光定量PCR的标准曲线。收集自2016年7月至2017年7月间于首都医科大学附属北京胸科医院胸外二科就诊并确诊非小细胞肺癌,符合实验组入组标准且计划接受手术治疗患者100例,采集外周静脉血2ml。同期纳入40例良性肺疾病患者及40例健康志愿者作为对照组。提取全血中单个核细胞的总RNA,反转录获得cDNA,采用探针法荧光定量PCR检测非小细胞肺癌患者组、良性肺疾病组及健康对照组EpCAM与CK19 mRNA表达量的差异。结果 1)非小细胞肺癌患者组EpCAM及CK19表达显著高于良性肺疾病组及健康人对照组(P=0.00),差异具有统计学意义;2)EpCAM及CK19表达水平与肿瘤分期相关,肿瘤分期级别越高mRNA表达水平越高;I期非小细胞肺癌患者CK19表达水平显著高于EpCAM(P=0.002);3)鳞癌患者中,CK19表达水平显著高于EpCAM(P=0.017);4)非小细胞肺癌患者CK19表达水平与EpCAM表达水平存在线性相关关系。结论 1)循环肿瘤细胞的检测有可能作为非小细胞肺癌患者早期诊断的重要评价指标而用于临床对于非小细胞肺癌患者的早期诊断。2)荧光定量PCR方法检测非小细胞肺癌患者CTCs中CK19及EpCAM的表达量,可能成为一种简便可行的早期筛查、诊断非小细胞肺癌的方法;分析CK19及EpCAM表达水平的差异,能够在一定程度上判断NSCLC患者的病理类型,为临床指导治疗,选择治疗方案提供一定参考价值。