目的：通过组织块法分离培养人脐带间充质干细胞(human umibilical cordmesenchymal stem cells, hUCMSCs)，并用不同浓度脂多糖(Lipopolysaccharides,LPS)刺激细胞，探讨LPS对hUCMSCs细胞增殖、凋亡的影响及其调控机制。研究低浓度LPS预处理对hUCMSCs的适应性保护作用，并探讨其潜在机制，为增强hUCMSCs的内毒素耐受性提供理论基础。方法：1利用组织块法从足月儿脐带中分离培养hUCMSCs。倒置显微镜观察细胞形态；MTT法检测第3、5、10代细胞增殖活性；免疫荧光染色法测定细胞表面标记物。2采用不同浓度LPS（0、0.01、0.1、1.0、10.0、20.0、30.0、40.0、50.0μg/ml）刺激hUCMSCs。MTT法检测细胞增殖活性；AO/EB染色法及流式细胞术（flowcytometry, FCM）检测细胞凋亡情况；酶联免疫吸附法（enzyme-linkedimmunosorbent assay, ELISA）检测Caspase-8、Caspase-3活性及DNA片段。3低浓度LPS（0.1、1.0、10.0、20.0μg/ml）预处理12h后，再给予hUCMSCs50.0μg/ml LPS作用24h。FCM及Hoechst染色法检测细胞凋亡情况；MTT法检测细胞的存活率。4低浓度LPS（0.1、1.0、10.0、20.0μg/ml）预处理12h，或再给予hUCMSCs50.0μg/ml LPS作用24h，或给予si-FLIPL及NF-κB特异性抑制剂PDTC，Westernblot检测c-FLIPL和NF-κBp65蛋白表达变化情况；FCM检测细胞凋亡变化情况；ELISA检测Caspase-8、Caspase-3活性变化情况。结果：1组织块法分离培养出成纤维样细胞，呈贴壁漩涡样生长。第3、5、10代细胞增殖快速，趋势皆呈“S”型。细胞高表达CD105、CD90、CD73和CD44，低表达HLA-I；不表达CD31、CD45和HLA-DR。2MTT结果显示，与对照组比较，0.01-10.0μg/ml LPS干预组吸光度值（A值）明显增高（P＜0.05或P＜0.01），其中1.0μg/ml LPS干预组最高（P＜0.01）；而20.0μg/ml LPS干预组无明显变化（P＞0.05），30.0-50.0μg/ml LPS干预组A值明显降低（P＜0.01）。AO/EB示，0-10.0μg/ml LPS干预组未见明显凋亡细胞，20.0-50.0μg/ml LPS干预组可见明显细胞凋亡。FCM示：与对照组〔(2.68±0.27)%〕比较，1.0μg/ml LPS干预组细胞凋亡率〔(3.07±0.35)%〕无明显差异（P＞0.05），而30.0及50.0μg/ml LPS干预组凋亡率〔(8.92±3.77)%、(23.46±2.38)%〕明显增高（P＜0.01）。ELISA结果示：50.0μg/ml LPS明显提高了hUCMSCs Caspase-8、Caspase-3活性及DNA片段化程度（P＜0.01），但Caspase-8抑制剂z-IETD-FMK可显著降低其水平（P＜0.01）。3FCM结果示：与未预处理组比较，0.1和1.0μg/ml LPS预处理组hUCMSCs细胞凋亡率明显下降（P＜0.01），而10.0和20.0μg/ml LPS预处理组细胞凋亡率无明显变化（P＞0.05）。Hoechst染色显示，1.0μg/ml LPS预处理可显著降低50.0μg/ml LPS引起的细胞凋亡。MTT结果示，1.0μg/ml LPS预处理可使50.0μg/mlLPS引起的hUCMSCs存活率从（62.42±6.62）%上升至（84.15±6.30）%（P＜0.01）。4与对照组比较，0.1和1.0μg/ml LPS预处理组hUCMSCs中c-FLIPL蛋白表达明显升高（P＜0.01）；且1.0μg/ml LPS预处理可逆转50.0μg/ml LPS诱导的c-FLIPL蛋白表达下降（P＜0.01）。si-FLIPL可显著降低1.0μg/ml LPS预处理引起的c-FLIPL高表达水平（P＜0.01），并减弱1.0μg/ml LPS预处理抗细胞凋亡的能力。PDTC可同时下调1.0μg/ml LPS预处理引起的NF-κBp65和c-FLIPL高表达水平（P＜0.01）。结论：通过组织块法从人脐带中成功分离、培养出hUCMSCs。LPS对hUCMSCs细胞增殖具有浓度依赖性及双向效应。高浓度LPS能够活化Caspase-8/3信号分子引起hUCMSCs细胞凋亡。适宜浓度的LPS预处理能够抵制高浓度LPS引起的hUCMSCs细胞凋亡，增强hUCMSCs的内毒素耐受性；其机制与NF-κB信号通路活化，上调抗凋亡蛋白c-FLIPL高表达有关。