研究背景:随着社会经济的发展,人类疾病谱和致病模式发生了重大变化,慢性非感染疾病对人类健康的危害性越来越大,其中包括肿瘤性疾病,它严重危害患者的身体健康。由于肿瘤的治愈率低,治疗费用高,肿瘤病人往往又伴有多种并发症,肿瘤本身及治疗带来的相关问题不仅加重患者家庭经济负担,也严重影响患者及亲友的精神健康。另外,流行病学研究表明,肿瘤的发病率呈上升趋势。无疑,肿瘤性疾病治疗上的进展,必将产生巨大的社会效益。　　 肿瘤的传统治疗手段有手术治疗、化学药物治疗、放射性射线治疗。随着分子生物学及免疫学的进展,生物治疗成为肿瘤治疗的第四种治疗模式。生物治疗的含义是:通过调动宿主的自然防御机制给予机体某些物质,改善患者机体与肿瘤之间的关系,达到杀灭肿瘤的目的。我们把改善患者机体与肿瘤关系的物质称为生物反应调节剂,生物反应调节剂与传统的细胞毒类药物不同,具有选择性强,毒性低,副作用小,而且一般无剂量依赖性等特点。另外,生物反应调节剂单一应用一般有效,同时亦可联合应用或者联合其他治疗手段综合治疗。随着对肿瘤发生、发展的分子机制的研究的深入,研究证实肿瘤的发生、进展是多因素、多基因、多信号途径综合作用的结果,因此肿瘤的生物治疗趋势必将是多途径、多靶点的联合治疗模式。　　 目的:通过噬菌体展示技术,筛选出血型抗原B模拟多肽；合成模拟多肽/Fas基因；RT-PCR获得Mip3β基因；经双酶切构建人血型B抗原模拟多肽/Fas融合基因、Mip3β双表达重组质粒。通过巨噬细胞炎症蛋白的趋化作用、抗原抗体的特异性免疫作用、Fas基因介导的细胞凋亡作用,多途径杀伤肿瘤细胞。　　 方法　　 实验一:提取MIP3β mRNA,经RT-PCR获得cDNA序列,经双酶切插入pIRES多克隆B位点,酶切电泳初步鉴定,DNA测序鉴定。　　 实验二:血型B抗原模拟多肽的生物淘选。利用噬菌体随机十二肽库经包被-结合-洗脱-扩增等循环三轮,对筛选的克隆ELISA鉴定。最后提取DNA测序,确定模拟多肽氨基酸序列。　　 实验三:合成模拟多肽/Fas融合基因,经双酶切插入pIRES多克隆A位点,酶切电泳初步鉴定,DNA测序鉴定。　　 结果　　 实验一:成功提取MIP3β mRNA,经RT-PCR获得cDNA序列,经双酶切插入入PIRES质粒多克隆B位点,DNA测序鉴定正确。　　 实验二:成功利用噬菌体随机肽库筛选出血型抗原B模拟多肽序列,初步验证其结合特异性,经DNA测序后,依据随机肽库应用说明给出的密码子简表,获得多肽序列:HSLKHTQMSYSS,TKNMLSLPVGPG。　　 实验三:合成模拟多肽/Fas融合基因,经双酶切插入pIRES多克隆A位点,DNA测序鉴定正确。　　 成功获得血型抗原B模拟多肽。经DNA测序鉴定,人血型B抗原模拟多肽/Fas融合基因、Mip3β双表达重组质粒构建成功。　　 结论:利用噬菌体随机肽库筛选血型B抗原模拟肽具有可行性,为糖类抗原的应用提供一种新方法。生物治疗的未来模式必将是多靶点、多途径的治疗模式,本实验根据这一思路成功构建人血型B抗原模拟多肽/Fas融合基因、Mip3β双表达重组质粒,为下一步质粒的抗肿瘤效应研究奠定实验基础。