研究背景:随着生活条件的改善、老龄化人口的增多,骨性关节炎的发病率也在逐年增高。但目前治疗晚期骨关节炎的有效方法仍以人工全关节置换术为主。无论技术如何改进、假体的材质如何变化,就目前而言,人工关节假体周围无菌性松动仍是人工关节置换术后比较常见的严重并发症。因此人工关节置换术后出现假体周围骨溶解的机制以及其治疗方法越来越被大家所重视。现在无菌性松动的发病机制仍不是很明确,国内外的研究提出了多种理论,包括磨损微粒诱导骨溶解理论、应力遮挡理论、微动理论、高流体压力理论和个体遗传差异理论等,其中磨损微粒诱导骨溶解理论被大多数人所认可。磨损颗粒可以产生某些炎性细胞因子,从而促进假体周围骨溶解疾病的进展,而促炎性细胞因子的表达又被表观遗传修饰微妙地调控着。目前已有研究表明作为重要表观遗传调控因子的Brd4对包括炎症在内的多种疾病的发病机制起着重要的作用,是许多疾病的潜在治疗靶点,在抗炎和抗肿瘤方面有着较高的潜在价值。但Brd4如何调控这些促炎性细胞因子表达的机制尚不明确,在假体周围骨溶解方面的研究也鲜有报道。目的:本研究旨在探讨Brd4在钛颗粒诱导小鼠巨噬细胞RAW264.7细胞产生炎性细胞因子这一过程中的潜在作用。从而进一步探究BET蛋白在人工关节假体周围骨溶解中作用,为人工关节假体周围骨溶解的治疗及药物研发提供一定新思路。方法:本实验均选用从美国标准细菌库获得的小鼠巨噬细胞RAW264.7细胞作为实验对象。用Ti颗粒、Ti颗粒联合JQ1(一种Brd4抑制剂)或者Ti颗粒联合Brd4 siRNA分别刺激RAW264.7细胞,用CCK-8法测定这些细胞的活性。用酶联免疫吸附试验(ELISA)和逆转录-聚合酶链反应(RT-PCR)方法检测炎症细胞因子(TNF-a、IL-6和IL-1b)的表达。用Western blot和RT-PCR法检测Brd4的表达。用Western blot法分析NF-kB信号相关蛋白的表达。用免疫共沉淀法研究乙酰化NF-kB与Brd4的结合作用。结果:Ti颗粒处理能显著提高RAW264.7细胞中TNF-a、IL-6和IL-1b的生成,而JQ1或Brd4 siRNA可以抑制这个过程。Ti颗粒能够增强Brd4的表达,这个过程可以被JQ1的处理所抑制。Ti颗粒增强了RAW264.7细胞中NF-kB p65和IKK的磷酸化,降低了IkBα蛋白的表达,这一过程可以被JQ1的处理所抑制。另外Co-IP分析表明Ti颗粒促进了RAW264.7细胞中Brd4与乙酰化NF-κB p65的结合,而这一过程也可以被JQ1的处理所抑制。结论:本研究数据表明,Ti颗粒增强了Brd4的表达,并且激活了NF-kB信号传导,增强了Brd4与乙酰化NF-κB p65的结合,从而导致小鼠巨噬细胞在体外产生炎性细胞因子。