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1目的:观察益肺健脾方对慢性阻塞性肺疾病(COPD)模型大鼠的治疗作用,并基于EGFR/MAPK/MUC5AC通路从气道黏液高分泌角度探析益肺健脾方的作用机制。2方法:选雄性SD大鼠96只,按照随机表分为6组(正常组,模型组,益肺健脾方高、中、低剂量组和氨溴索组),各组皆16只大鼠。COPD肺脾两虚型大鼠模型制造采用香烟烟雾暴露联合气管内滴注脂多糖(LPS)结合番泻叶灌胃泻下方法建立,造模周期共49天。造模完成后各组皆予相应药物连续灌胃给药6周,其中正常组与模型组皆予以生理盐水灌胃,给药结束后进行肺及支气管组织标本取材。取右肺下叶支气管及肺组织,行HE染色观察右肺下叶支气管及肺部病理变化;取右肺中叶支气管组织,行AB-PAS染色观察支气管杯状细胞及黏液分泌状况;取左肺一级、二级支气管组织,行Western blot法检测各组大鼠支气管肺组织中EGFR、MUC5AC蛋白和ERK1/2、JNK、p38总蛋白及磷酸化蛋白表达量,行RT-q PCR法检测各组大鼠支气管肺组织中EGFR、ERK、JNK、p38及MUC5AC mRNA的表达情况。3结果:(1)HE染色结果:正常组大鼠支气管及肺泡形态正常、结构完整,支气管管壁未见增厚,管腔通畅,未见黏膜下炎性细胞浸润,未见纤毛脱落;模型组大鼠支气管管壁增厚明显,管腔狭窄,上皮细胞、纤毛脱落明显,伴见大量炎性细胞浸润,肺泡壁多处变薄甚至破裂,大量融合产生肺大疱;相较于模型组,益肺健脾方各剂量组与氨溴索组大鼠支气管病理形态皆呈现不同程度的改善,主要体现包括支气管管腔局部变形,管壁稍显增厚,纤毛部分倒伏,未见明显脱落,上皮细胞少量坏死脱落,伴见炎性细胞少量浸润,部分肺泡融合,其中以益肺健脾方高剂量组和氨溴索组改善更为显著。(2)AB-PAS染色结果:正常组大鼠支气管仅见到极少量杯状细胞存在;模型组大鼠支气管则见有大量杯状细胞增生,并伴有较多黏液分泌;益肺健脾方中、低剂量组可见杯状细胞分布较模型组减少;高剂量组和氨溴索组可见杯状细胞数量明显减少。(3)Western blot法检测各组大鼠支气管肺组织中EGFR、MUC5AC蛋白和ERK1/2、JNK、p38总蛋白及磷酸化蛋白表达量与正常组相比较,模型组大鼠支气管肺组织中EGFR、MUC5AC蛋白和ERK1/2、JNK、p38总蛋白及磷酸化蛋白表达量皆明显升高(P<0.01)。相较于模型组,益肺健脾方高剂量组各指标检测结果显示蛋白表达量显著下降(P<0.01);益肺健脾方中剂量组EGFR、P-p38、p38蛋白表达量皆明显降低(P<0.01),ERK1/2、JNK、P-ERK1/2、P-JNK、MUC5AC蛋白表达量皆降低(P<0.05);益肺健脾方低剂量组EGFR、P-p38蛋白表达量皆明显降低(P<0.01),p38蛋白表达量降低(P<0.05),ERK1/2、JNK、P-ERK1/2、P-JNK、MUC5AC蛋白表达量相较于模型组差异不具有统计学意义(P>0.05);氨溴索组大鼠支气管肺组织中EGFR、P-p38、p38蛋白表达量皆明显降低(P<0.01),ERK1/2、JNK、P-ERK1/2、P-JNK、MUC5AC蛋白表达量皆降低(P<0.05)。益肺健脾方高剂量组EGFR、P-p38、p38、ERK1/2、JNK、P-ERK1/2、P-JNK、MUC5AC各蛋白表达量检测结果显示最低。四组治疗组之间相互比较:益肺健脾方高剂量组EGFR、P-p38蛋白表达量与中、低剂量组比较差异有统计学意义(P<0.01),与氨溴索组比较差异有统计学意义(P<0.05);益肺健脾方高剂量组p38、ERK1/2、JNK、P-ERK1/2、P-JNK、MUC5AC蛋白表达量与益肺健脾方低剂量组比较差异有统计学意义(P<0.05),与益肺健脾方中剂量组及氨溴索组比较无明显差异(P>0.05)。(4)RT-q PCR法检测各组大鼠支气管肺组织中EGFR、ERK、JNK、p38及MUC5AC mRNA表达量与正常组相比较,模型组大鼠支气管肺组织中EGFR、ERK、JNK、p38及MUC5AC mRNA的表达皆显著升高(P<0.01)。相较于模型组,益肺健脾方高剂量组大鼠支气管肺组织中EGFR、JNK、MUC5AC mRNA表达量皆明显降低(P<0.01),ERK、p38MAPK mRNA表达量皆降低(P<0.05);益肺健脾方中剂量组MUC5AC mRNA表达量显著降低(P<0.01),益肺健脾方低剂量组MUC5AC mRNA表达量下降(P<0.05),益肺健脾方中、低剂量组EGFR、JNK、ERK、p38MAPK mRNA表达量与模型组比较差异无统计学意义(P>0.05);氨溴索组EGFR、JNK、ERK、p38MAPK、MUC5AC mRNA表达量皆明显降低(P<0.01)。四组治疗组间比较:益肺健脾方高剂量组EGFR、JNK、ERK、p38MAPK及MUC5AC mRNA表达量与低剂量组相比较差异有显著统计学意义(P<0.01);益肺健脾方高剂量组EGFR、JNK、ERK、p38MAPK mRNA表达量与中剂量组及氨溴索组比较差异无统计学意义(P>0.05);益肺健脾方高剂量组MUC5AC mRNA表达量与中剂量组比较差异有统计学意义(P<0.05),与氨溴索组比较差异无统计学意义(P>0.05)。4结论:(1)通过实验中对各分组大鼠一般情况观察以及对HE染色、AB-PAS染色结果解读,再次成功验证了香烟烟雾暴露联合气管内滴注脂多糖(LPS)结合番泻叶灌胃泻下方法建立COPD肺脾两虚型大鼠模型具有一定的科学性和可复制性。(2)经益肺健脾方治疗后大鼠支气管肺组织病理损伤可减轻,且气道结构重塑可改善,其中益肺健脾方高剂量组改善更为明显。(3)基于本实验研究结果可推断:益肺健脾方可通过抑制EGFR/MAPK通路中多环节的活化,调控黏蛋白MUC5AC的表达,改善气道黏液高分泌。