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第一部分:无创性生殖道沙眼衣原体感染诊断技术的建立目的:通过比较分析SAT法,PCR法和Clearview法检测生殖道沙眼衣原体感染的灵敏度和特异度建立一种无创性生殖道沙眼衣原体检测方法。方法:分别应用Clearview法,PCR法和SAT法对762例华山医院性病门诊初诊患者进行生殖道沙眼衣原体感染检测。根据“扩大金标准”,两种或两种以上检测方法阳性者确定为生殖道沙眼衣原体感染。分别对三种方法的灵敏度和特异度进行分析。结果:共有真阳性病例84例,其中男52例,女32例。SAT法检测的灵敏度和特异度分别为98.81%和99.26%;PCR法检测的灵敏度和特异度分别为98.81%和99.56%;Clearview法检测的灵敏度和特异度分别为54.76%和94.10%。三种检测方法的特异度无明显差异。SAT法和PCR法检测的灵敏度无明显差异,Clearview法的灵敏度较SAT法和PCR法显著降低。结论:SAT法是一种灵敏度和特异度都很高的无创性生殖道沙眼衣原体检测方法,可以广泛应用于临床筛查。第二部分:生殖道沙眼衣原体感染患者外周血Treg及抑制性因子水平测定目的:研究生殖道沙眼衣原体感染患者外周血CD4~+CD25~+Foxp3~+调节性T细胞(Treg细胞)数量和及其分泌抑制性细胞因子功能的变化。方法:采用三色流式细胞仪检测外周血CD4~+CD25~+及转录因子Foxp3~+T细胞,共60例,分为三组。其中20例生殖道沙眼衣原体感染伴炎症患者;20例生殖道沙眼衣原体感染不伴炎症患者;20例正常人。同时,用免疫磁珠细胞分选技术从外周血中分选出高纯度的CD4~+CD25~+T细胞,检测细胞内白介素-10(IL-10)和转化生长因子β(TGF-β)分泌水平及经体外PMA刺激24小时后再次检测IL-10和TGF-β水平。结果:1)感染不伴炎症组外周血CD4~+CD25~+Foxp3~+Treg细胞占CD4~+T细胞比例为5.82±0.91%;感染伴炎症组的比例为5.84±0.87%;正常对照组的比例5.65±0.78%。三组外周血CD4~+CD25~+Foxp3~+Treg细胞占CD4~+T细胞的比例无显著差异(P＞0.05)。2)感染不伴炎症组外周血CD4~+CD25~+IL-10~+T细胞和CD4~+CD25~+TGF-β~+T细胞占CD4~+CD25~+T细胞的比例分别为0.47±0.21%和0.11±0.05%;感染伴炎症组的比例分别为0.41±0.17%和0.10±0.04%;正常对照组比例分别为0.39±0.17%和0.09±0.04%。三组外周血抑制性细胞因子(IL-10、TGF-β)阳性细胞比例无显著差异(P＞0.05)。3)经PMA刺激后24小时后,感染不伴炎症组外周血CD4~+CD25~+IL-10~+T细胞和CD4~+CD25~+TGF-β~+T细胞占CD4~+CD25~+T细胞的比例分别为2.10±0.48%和0.98±0.34%;感染伴炎症组的比例分别为1.37±0.35%和0.56±0.20%;正常对照组比例分别为1.44±0.34%和0.58±0.18%。感染不伴炎症组外周血抑制性细胞因子(IL-10、TGF-β)阳性细胞比例较正常对照和感染伴炎症组显著升高(P＜0.05)。结论:生殖道沙眼衣原体感染患者外周血CD4~+CD25~+Foxp3~+Treg细胞数量无明显改变。经PMA刺激后,感染无炎症组患者外周血CD4~+CD25~+T细胞分泌抑制性细胞因子功能显著得到增强。第三部分:生殖道沙眼衣原体感染患者局部黏膜Treg水平研究目的:研究生殖道沙眼衣原体感染患者局部黏膜CD25和Foxp3表达水平。方法:应用免疫荧光染色方法检测女性生殖道沙眼衣原体感染患者宫颈黏膜CD25和Foxp3水平。共分三组:10例感染伴炎症患者,10例感染不伴炎症患者及10例正常对照。结果:女性生殖道沙眼衣原体感染患者局部宫颈黏膜有CD25阳性细胞和Foxp3阳性细胞荧光表达。正常对照宫颈黏膜中无CD25阳性细胞和Foxp3阳性细胞荧光表达。感染不伴炎症组宫颈黏膜CD25阳性细胞和Foxp3阳性细胞的数量和荧光强度都较感染伴炎症组显著升高。结论:生殖道沙眼衣原体感染后,CD25阳性和Foxp3阳性细胞从外周血或淋巴组织中迁移到局部生殖道黏膜并活化。感染不伴炎症患者CD25阳性和Foxp3阳性细胞迁移数量及功能明显强于感染伴炎症患者。第四部分:生殖道沙眼衣原体感染患者局部粘膜抑制性细胞因子检测目的:研究生殖道沙眼衣原体感染患者局部生殖道黏膜抑制性细胞因子的mRNA水平。方法:应用实时荧光定量RT-PCR检测宫颈粘膜组织中Treg细胞分泌的抑制性细胞因子IL-10、TGF-β、PD-1、CTLA-4和GITR的mRNA水平。共分三组,其中10例生殖道沙眼衣原体感染伴炎症患者,10例生殖道沙眼衣原体感染不伴炎症患者和10例正常人。结果:正常对照组、感染伴炎症组和感染无炎症组IL-10、TGF-β、PD-1、CTLA-4、GITR含量有显著差异(P＜0.05)。其中正常组抑制性细胞因子水平最低,感染伴炎症组较高,而感染无炎症组细胞因子水平最高。结论:生殖道沙眼衣原体感染感染后,外周血Treg向局部黏膜转移,并活化且分泌抑制性细胞因子。感染伴炎症患者Treg活化适度,局部黏膜抑制性细胞因子较正常适度升高,感染不伴炎症患者Treg活化过度,局部黏膜抑制性细胞因子水平过度升高。