RNA干涉(RNA interference，RNAi)是上世纪末发现的生物体用来防御外来病毒侵染、防止转座子过度转座、保护基因组的重要手段，通过小干扰RNA(smallinterfering RNA，siRNA)介导与其互补的mRNA特异性降解。RNAi从发现开始就受到病毒研究学者的高度重视，被认为是潜在的抗病毒感染的有效方法之一，现已经广泛用于抗病毒的研究，包括人类免疫缺陷病毒Ⅰ型、乙型肝炎病毒、丙型肝炎病毒、登革热病毒、脊髓灰质炎病毒、口蹄疫病毒以及呼吸道合胞病毒等等。　　 流感病毒是单股负链分节段RNA病毒，在其复制周期中有vRNA、cRNA和mRNA，都可作为RNA干扰的靶分子。本研究的目的是探索RNA干扰技术用于流感病毒防治的可能性。首先采用质粒载体表达了3种针对流感病毒m基因的shRNA型siRNA，通过Real-time PCR和Western blotting检测，发现3种siRNA均可在mRNA水平有效降低靶蛋白的表达，而且可以抑制流感病毒其它蛋白的表达，抑制效率最高的达到60％以上，说明这三种针对m基因的siRNA对流感病毒的复制具有一定作用。为了获得抑制效率更高的靶点，我们采取化学合成的方法合成了分别针对pa基因、np基因和m基因的4种siRNAs，直接转染细胞，通过Real-time PCR检测对靶基因表达的抑制作用以及对非靶基因的影响，结果显示针对不同靶点的4种siRNAs同样不仅抑制了靶基因的表达，也抑制了非靶基因的表达，尤其是当同时转染4种siRNA时抑制效率达到最高，即通过多靶点同时作用获得了更好的抑制效果。鉴于上述siRNA的抑制效果均不理想，考虑到合理设计的局限性，我们探索了利用基于流感病毒基因组的siRNA文库筛选抑制效率高的靶点的可能性。将流感病毒的8个基因与tk基因和puro基因融合克隆到表达载体，重组质粒转染细胞构建稳定表达细胞株，建立了用于筛选文库的tk-puro-v融合基因筛选系统；体外转录获得流感病毒基因组dsRNA，经RNaseⅢ切割获得20-22bp siRNA，插入到已经构建的表达文库siRNA的双启动子型表达载体。文库的鉴定和筛选工作有待进一步开展。　　 本研究获得了多个能抑制流感病毒复制的siRNA，在构建基于病毒基因组的siRNA文库方面进行了有益的尝试，为探索RNA干扰技术用于流感病毒的防治搭建了很好的技术平台，奠定了良好的工作基础。