【摘 要】
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炎症性肠病（Inflammatory bowel disease,IBD）作为一种全球性疾病,对患者造成巨大困扰,肠道微生物和细胞因子参与了 IBD的发病过程。肝螺杆菌（Helicobbacter hepaticus,H.hepaticus）在某些易感小鼠品系中引起慢性肠炎,被广泛用于IBD肠炎模型的建立。IL-17作为调节炎症和免疫反应的关键细胞因子,在H.hepaticus致肠炎模型中作用未得
【基金项目】
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江苏省重点研发计划（社会发展）项目基金（编号:BE2020674）；
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炎症性肠病（Inflammatory bowel disease,IBD）作为一种全球性疾病,对患者造成巨大困扰,肠道微生物和细胞因子参与了 IBD的发病过程。肝螺杆菌（Helicobbacter hepaticus,H.hepaticus）在某些易感小鼠品系中引起慢性肠炎,被广泛用于IBD肠炎模型的建立。IL-17作为调节炎症和免疫反应的关键细胞因子,在H.hepaticus致肠炎模型中作用未得到详细阐述。因此,本研究旨在通过使用H.hepaticus感染常用品系小鼠以及IL-17-/-鼠,研究IL-17在H.hepaticus感染中的作用。研究方法:首先,我们使用H.hepaticus感染IL-10-/-、BALB/c、C57BL/6小鼠各5只,并设置对应数量对照组,在感染8 W后比较各小鼠体重、结肠长度、结肠载菌量等指标变化情况,H&E染色评价各组肠炎症状,RT-PCR检测IL-17以及其他炎性细胞因子的转录水平,比较IL-17转录水平是否与肠炎的严重程度相关;然后,我们使用H.hepaticus感染IL-17-/-小鼠和C57BL/6各30只,并设置对应数量对照组,在2W、4 W、8 W、12 W、16 W进行采样,比较各组小鼠体重、结肠长度、结肠载菌量、SOD活性等指标变化情况,H&E染色评价各组是否出现肠炎症状,RT-PCR检测各炎性细胞因子的转录水平,免疫组化染色检测结肠组织HMGB1和CX3CR1的表达情况;最后,我们对IL-17-/-小鼠和C57BL/6小鼠感染H.hepaticus过程中肠屏障完整性相关指标进行系统评价,包括使用RT-PCR检测肠损伤修复相关基因IL-22等的转录水平,使用阿利新蓝染色检测黏液表达情况,运用免疫组化检测溶菌酶（Lysozyme）的表达水平。实验结果发现:（1）IL-10-/-小鼠引起了以大面积炎性细胞浸润和黏膜结构改变为特征的慢性结肠炎,BALB/c小鼠引起了少量炎性细胞浸润和部分腺体缺失为特征的轻微结肠炎,C57BL/6小鼠未引起结肠炎;但本研究发现H.hepaticus的感染都能引起IL-17转录水平的上调,且较为严重的结肠炎症状通常伴随着较高的IL-17水平,表明IL-17可能在H.hepaticus感染进程中发挥着重要作用。（2）IL-17-/-感染组体重降低,结肠缩短且有着更高的H.hepaticus载菌量,超氧化物歧化酶水平降低,固有层和隐窝内淋巴细胞浸润,杯状细胞和结肠腺缺失以及IL-6、TNF-α等炎性基因转录水平的上调;IHC检测发现机体对抗炎症和感染的重要保护因子HMGB1有着较高的表达水平,并且在H.hepaticus感染进程中起重要作用的CX3CR1+细胞也出现在固有层中。（3）通过RT-PCR检测发现IL-17-/-感染组中肠屏障相关基因如IL-22、ZO-1、Claudin-1和Mucin-1等的转录水平相比于WT感染组有一定的降低,阿利新蓝染色发现肠腺数量大幅减少,IHC检测表明溶菌酶Lysozyme表达量降低。这些数据表明在IL-17-/-小鼠感染H.hepaticus后,肠屏障功能遭到破坏。以上结果表明:H.hepaticus感染多种品系小鼠均引起IL-17的上调,上调程度与小鼠肠炎严重程度正相关;而缺失IL-17可导致小鼠感染H.hepaticus后肠道炎性因子大量表达、促炎性巨噬细胞浸润、IL-22表达减少、隐窝受损、肠腺减少等典型慢性炎症性肠病症状。我们的研究结果对深入研究炎症性肠病发病机制具有重要意义。
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