论文部分内容阅读
目的:通过体外实验研究异甘草素(Isoliquiritigenin,ISL)对胶质瘤干细胞(Glioma stem cells,GSC)侵袭与迁移能力的影响,体内实验研究ISL对荷胶质瘤干细胞裸鼠的影响。为ISL在治疗胶质瘤的抗肿瘤机制方面提供新的实验依据。方法:(1)培养皿中利用DMEM含10%胎牛血清培养基培养SHG44胶质瘤细胞。SHG44胶质瘤干细胞是利用DMEM-F12不含胎牛血清培养基从DMEM含10%胎牛血清培养基培养的SHG44胶质瘤细胞提取和纯化,同时用免疫荧光检测胶质瘤干细胞的干性特征(CD133、Nestin联合鉴定)。(2)细胞划痕和Transwell侵袭实验观察通过DMSO、20μmol/L和80μmol/L的异甘草素作用SHG44胶质瘤细胞后对其迁移和侵袭的影响;western-blot分析经异甘草素干预48h后质金属蛋白酶2(Matrix metalloproteinase-2,MMP-2)和基质金属蛋白酶9(Matrix metalloproteinase,MMP-9)的表达变化情况。(3)Transwell迁移和侵袭实验观察经DMSO、20μmol/L和80μmol/L的异甘草素作用SHG44胶质瘤干细胞后对其迁移和侵袭能力的影响,DMSO、20μmol/L和80μmol/L异甘草素作用胶质瘤干细胞48h后,Real-time PCR检测MMP-2和MMP-9中RNA的表达量,western-blot分析经异甘草素干预48h后MMP-2;MMP-9的表达变化情况。(4)SHG44胶质瘤干细胞0.1ml(浓度为10~6/ml)快速注射于BALB/C裸鼠体内建立异种移植模型,造模成功后采用腹腔注射DMSO、低剂量异甘草素、高剂量的异甘草素和固定剂量的替莫唑胺,比较给药前后的相对肿瘤增殖率、肿瘤体积变化和肿瘤抑制率,单因素方差分析比较各组间差异。结果:(1)倒置显微镜管观察SHG44胶质瘤细胞贴壁生长,SHG44胶质瘤于培养瓶中悬浮于培养瓶中呈类圆形生长,扫描电镜下观察类圆形细胞见长梭形突起和细小突起,并以触角交通;胶质瘤干细胞标记CD133、Nestin呈阳性表达;(2)经DMSO、20μmol/L和80μmol/L的ISL处理SHG44胶质瘤细胞后的其迁移和侵袭能力降低;MMP-2、MMP-9的表达水平均降低。(3)经DMSO、20μmol/L和80μmol/L的ISL处理SHG44胶质瘤干细胞后的其迁移和侵袭能力降低;ISL可以抑制MMP-2、MMP-9的基因表达和MMP-2、MMP-9的蛋白水平,并均降呈剂量依赖性。(4)BALB/C裸鼠异种移植模型腹腔注射DMSO、低剂量和高剂量的ISL和固定剂量的TMZ 21天后,低剂量和高剂量的ISL处理的模型中相对肿瘤增殖率小于100%,2个组之间差异有统计学意义(P<0.05);在给药后的21d内,DMSO、低剂量和高剂量的ISL和固定剂量的TMZ组中BALB/C裸鼠模型体内的肿瘤体积都呈逐渐增大趋势,给药9d内各组肿瘤体积未见明显差异,但在12d后高剂量ISL给药组动物模型的肿瘤体积增量小于未给药组(P<0.05),在给药组中,高剂量的ISL在同一天动物模型相对应的肿瘤体积增量较低剂量ISL呈降低趋势。结论:(1)ISL能够通过影响MMP-2、MMP-9基因和蛋白的表达来抑制胶质瘤干细胞的迁移和侵袭。(2)ISL对裸鼠荷SHG44胶质瘤干细胞的增殖具有一定的抑制效果。