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研究背景: Graves病(Graves disease，简称GD)又称毒性弥漫性甲状腺肿，是一种常见的器官特异性自身免疫疾病。其具体致病机制尚不明确。研究认为，除了患者自身的免疫状态，遗传、环境等因素及其交互作用在该病的发生中也起着重要作用。T helper(Th)17细胞是CD4+辅助性T细胞的一种，在许多自身免疫疾病中起重要作用。早期对于GD的研究主要集中在Th1-Th2轴线，但并无定论，而Th17细胞及其相关细胞因子在GD中却少有研究。为了更好的研究GD的致病机理，我们对未经治疗的GD患者外周血中的辅助性T细胞进行了检测，并对Th17相关基因多态性在GD发生中的作用进行了研究。 研究方法: 1.用流式细胞检测技术对初发GD患者及正常对照外周血中辅助性T细胞的数目进行检测。 2.用酶联免疫吸附测定法(ELISA)检测初发GD患者及正常对照外周血中IL-17A、IL-17F及IL-23的浓度。 3.在两个汉族人群(上海人群和厦门人群)中，留取其外周血，并提取全基因组DNA。采用高通量SNPstream芯片及Taqmn探针技术检测IL-17A、IL-17F和IL-23A基因多态性。 结果: 1.与正常对照相比，Th细胞在GD患者体内存在比例失衡的现象。初发GD患者Th1细胞、Th2细胞和Th17细胞在CD4+T细胞中的比例均显著高于正常对照，P值分别为0.02，1.0×10-3和0.02。而在两组实验中，并未发现Treg细胞在CD4+T细胞中的比例有明显的变化。 2.初发GD患者血清中IL-17A的浓度显著高于正常对照(57.6±3.8 ng/Lvs42.2±3.5ng/L，P值为4×10-3)。IL-17A基因rS8193037位点基因型及等位碱基在GD及正常人群中分布差异显著(Pgenotype=1.9×10-3;Pallele=6.7×10-4，OR=1.51，95％CI:1.19-1.92)。该位点与GO的发病也有相关性(Pgenotype=5×10-3;Pallele=6.6×10-3，OR=1.62，95％CI:1.14-2.30)。在上海人群中，还发现SNP位点rs4711998、rs3819025和rs3748067与GD及GO的发病相关(在GD中基因型分布差异的P值分别为1.91×10-2，1.3×10-2和2.4×10-2，在GO中其P值分别为4.7×10-2，8.8×10-3和3.4×10-2)。在厦门人群中，rS8193037仍与GD的发病有着较高的相关性(Pgenotype=4.4×10-3; Pallele=8.2×10-3，OR=1.66，95％CI:1.23-2.24)。单倍型TAGAGG也与GD发病相关，其分布频率在GD中显著高于正常对照(9.8％vs7.3％, P=2.4×10-2)。 3.在IL-17F基因的4个标签SNP中，只有位于基因5端的rS9463772与GD及GO的发病表现出了极强的相关性。该位点GD患者T碱基的携带率明显高于正常对照(16.8％vs11.6％，Pallele=7×10-5，OR=1.53，95％CI=1.24-1.90)。在厦门验证人群中，rS9463772的基因型及碱基分布也与GD发病相关(Pgenotype=2×10-2;Pallele=1.9×10-2，OR=1.37，95％CI:1.05-1.79)。通过构建含rs9463772位点的pGL3-IL-17F promoter luciferase报告基因质粒，发现该位点并未影响IL-17Fptomoter活性。在上海人群中，SNP位点rs763780也与GD的发生呈相关性(Pgenotype=0.017)，单倍型GCTT在GD患者与正常对照中的比例显著不同(P=7.9×10-3)。ELISA结果显示，IL-17F在GD患者及正常对照外周血中的表达并无显著差异。 4.IL-23A基因rs11171806位点与GD及GO的发生显著相关。在GD中，等位碱基G和等位碱基A的频率分别为95.7％和4.3％，而在正常对照中则为97.7％和2.3％，差异显著，P值为2.6×10-3。在第二个验证人群中，该位点仍与GD的发生显著相关(Pgenotype=2.5×10-2; Pallele=6.3×10-3，OR=2.15，95％CI:1.23-3.79)。在不同性别亚组的分析中，该位点与疾病的相关性在年龄大于40岁，或者女性亚组中表现得尤为显著(P值分别为1.8×10-2和5.0×10-3)。通过血清中IL-23浓度的检测，发现在GD患者和正常对照中，IL-23的表达差异显著(P=1.8×10-2)，该差异性在大于40岁的患者及女性亚组中也表型得更为显著(P值分别为5.9×10-3和2.7×10-3)。 结论: 本研究通过对GD患者Th细胞的检测，及Th17相关基因IL-17A、IL-17F和IL-23A的基因多态性与GD及GO易感性的关联分析，发现GD患者存在Th细胞的比例失调现象，IL-17A、IL-17F和IL-23A基因多态性与GD及GO的发病相关，血清中IL-17A与IL-23蛋白表达在GD患者及正常对照中存在差异。Th17及相关细胞因子在GD的发生中可能起重要作用。