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盐是抑制植物生长发育和限制农作物产量提高的重要环境因子,植物在长期进化过程中产生了许多适应盐胁迫的机制,主要包括提高抗氧化酶的活性、离子选择性吸收、离子区域化及合成渗透调节物质。渗透胁迫是盐胁迫对植物造成伤害的重要原因之一。为了避免渗透胁迫,植物细胞通过渗透调节来降低胞内水势,保持胞内水分,从而保证植物细胞的正常生理活动。参与渗透调节的物质被称为渗透调节剂,主要包括无机离子如:Na+、K+和有机小分子如多元醇、糖类、氨基酸等两大类。而糖类中的海藻糖是一种重要的渗透调节物质。海藻糖最重要的生物学功能是抗逆性,通常在干旱、高盐、高温等逆境胁迫下海藻糖作为一种相溶性介质对蛋白质、生物膜等生物大分子或细胞结构起保护作用。但海藻糖是否在拟南芥抗盐反应中发挥重要作用目前还缺乏分子方面的证据。
本研究对拟南芥海藻糖磷酸化酶基因AtTRP(Trehalose phosphorylase)在植物盐胁迫应答中的作用做了初步分析。通过PCR和RT-PCR分离和鉴定了该基因的T-DNA插入功能缺失纯合突变体,并利用该遗传材料对TRP在盐胁迫中的作用进行分析。在NaCl处理下,突变体trp的萌发和幼苗的生长受到了显著抑制,因此说明TRP基因在拟南芥应答盐胁迫反应中发挥作用。我们构建了TRP的GUS表达载体并转化野生型植株,经潮霉素筛选获得了TRP的GUS转基因阳性植株。GUS染色实验表明TRP主要在根、茎、叶和花中表达。同时还构建了TRP::p-Super1300+的超表达载体,转基因获得了TRP转基因拟南芥植物。带GFP标签的TRP瞬时表达载体的拟南芥原生质体转化实验表明TRP蛋白定位于拟南芥细胞质中。上述研究表明TRP参与调节盐胁迫应答反应。