阴痫大鼠模型的建立与证候评价

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目的:建立阴痫证大鼠模型,并建立模型的评价方法;制订《阴痫证大鼠模型辨证表》。方法:Wistar雄性大鼠40只,分为正常饮食组20只,高脂寒药饮食组20只(以高脂饲料及生地+大黄煎液饲养),饲养21天。然后,正常饮食组分为正常对照组、癫痫对照组各10只;高脂寒药饮食组分为阴痫对照组、阴痫中药组各10只;后3组以氯化锂-匹罗卡品(LiCl-PILO)腹腔注射法致痫。致痫当天开始,阴痫中药组接受五生丸合二陈汤煎液灌胃治疗qd×5天。每日观察痫性发作,共31天后实验结束。于实验前、高脂寒药饲养后,及致痫后第1、7、31天共进行5次中医辨证,及症状、行为学观察及测试。实验前、高脂寒药饲养后及致痫后7天尿检17-羟皮质类固醇(17-OH-CS)和皮质醇(CORT)。实验结束(致痫后32天)取血检测环磷酸腺苷(cAMP)、环磷酸鸟苷(cGMP)及总胆固醇(CHOL),并取脑组织进行病理检查。根据参考文献和预实验,自订《阴痫证大鼠模型辨证表》,该表由阳虚证、痰证、痫证3个维度组成,共19个辨证项目,包括体表色泽、肛温、蜷缩/扎堆、懒动、肌力、旷场活动、食量、饮水量、体重、大便性状、抽搐与痉挛等。于实验前、高脂寒药饲养后,及致痫后第1、7、31天共进行5次中医辨证。实验结束后,对各项目效能进行评价,筛选出贡献度高或具备辨证分层效果的项目,得出最终实验表格。成果:高脂寒药饲养后,大鼠日常活动减少、多睡懒动、毛色脏乱发黄、耳廓颜色变淡;摄食量减少(P<0.01);辨证“阳虚证”和“痰证”评分升高(P<0.01);正常饮食组在饲养21天后,尿17-OH-CS水平较饲养前上升(P<0.01),而高脂寒药饮食组无此现象。LiCl-PILO注射后,30只大鼠在(8.27±3.403)min潜伏期内首发痫性发作,其后29只大鼠进入癫痫持续状态(SE, Status Epilepticus),至第31天存活率43.3%(13/30),存活大鼠全部出现自发痫性发作(SRS, Spontaneous Recurrent Seizures)。首次SE后,3个致痫组大鼠蜷缩嗜睡、拱背竖毛、毛发爪甲淡白;肛温下降(P<0.01);初期进食量极少(无法测量);饮水量减少(P<0.01);抓力时间缩短(P<0.01);旷场活动量下降,站立数(P<0.01)、跨格数(P<0.05)及排便粒数(P<0.01);辨证“阳虚证”、“痰证”、“痫证”及“总分”(阴痫证)评分升高(P<0.01)。实验结束时,与阴痫对照组相比,阴痫中药组的饮水量较多(P<0.05);与自身致痫前比较,阴痫对照组的“痰证”得分无差别,而阴痫中药组得分降低(P<0.01);阴痫中药组的SRS频率最低,生存时间估值最长(P>0.05)。筛选后所得的最终《阴痫证大鼠模型辨证表》内的重要项目构成了一个拟合度高且稳定的logistic回归模型。结论:高脂寒药饲养可以赋予大鼠“阳虚痰湿”的体质;腹腔注射LiCl-PILO使大鼠具备痫病特点,且赋予了大鼠“阴痫”及“阳虚痰湿”的证候特点;经“以方测证”反证,通过高脂寒药饲养及腹腔注射LiCl-PILO所建立的阴痫大鼠模型,具备“阳虚痰湿”的证候特点;成功建立了包括症状、行为学及中医证候评分的综合方法,适合对阴痫大鼠进行证候评价;所建立的《阴痫证大鼠模型辨证表》实用且可靠。
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