Ghrelin对IBDV感染致雏鸡法氏囊损伤的影响及机制初探

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Ghrelin是具有多种生物学功能的小肽,具有调节能量代谢平衡、促进生长激素分泌、参与脂类代谢等功能,在哺乳动物还有抗炎和参与组织损伤修复等免疫调节作用。近年来,有关Ghrelin免疫调节作用引起了国内外研究者的兴趣。尽管禽类Ghrelin生理功能也有研究,但较哺乳动物Ghrelin研究时间短,研究还十分有限。已有报道禽类Ghrelin广泛分布于体内免疫器官,提示Ghrelin在其免疫系统可能同样发挥作用,但禽类Ghrelin相关研究极少报道。传染性法氏囊病(Infectious Bursal Disease,IBD)是鸡重要传染性病毒病之一,随着病原传染性法氏囊病病毒(Infectious Bursal Disease Virus,IBDV)变异株的不断出现和迅速蔓延,使本病防治难度增大。该病主要侵袭雏鸡中枢免疫器官法氏囊,病变法氏囊先肿大后萎缩,B淋巴细胞丧失功能或大量损失,造成机体免疫抑制,疫苗免疫应答下降或消失,对养禽业造成了极大危害,因此,我们的研究重点是探索防治该病的新思路。  本实验以IBDV感染的SPF雏鸡为研究对象,通过腹腔注射高低剂量Ghrelin (0.5 nM和1.0 nM),采用HE染色、Masson染色、免疫组织化学染色和实时定量PCR(Quantitative real-time PCR,qRT-PCR)等技术,探讨Ghrelin添加能否减缓IBDV导致的法氏囊损伤及其作用机制,既增添了禽类Ghrelin在免疫系统方面作用的基础资料,又为防治IBD提供新的思路。  1. Ghrelin对IBDV致SPF雏鸡法氏囊损伤的影响结果显示,IBDV感染SPF雏鸡1 d、2 d、3 d、4 d、5 d、7 d,通过对不同处理组即I组(IBDV)、LG组(0.5 nM Ghrelin+IBDV)和HG组(1.0 nM Ghrelin+IBDV)法氏囊病理学变化观察和病理评分、滤泡大小统计和纤维化程度观察发现,HG组和LG组法氏囊病理变化较I组轻微,即Ghrelin组法氏囊滤泡间质较I组窄,滤泡较I组大而多、滤泡内淋巴细胞丢失较I组轻微,且病理评分均低于I组;HG组和LG组滤泡面积显著高于I组(P<0.05),这有利于法氏囊更好地发挥免疫功能;HG组和LG组法氏囊纤维化程度较I组明显降低,暗示Ghrelin添加抑制了法氏囊内纤维形成。综上可知,Ghrelin可以减缓IBDV感染致雏鸡法氏囊损伤。  2. Ghrelin对IBDV致SPF雏鸡法氏囊损伤调节作用结果显示,IBDV感染SPF雏鸡1 d、2 d、3 d、4 d、5 d、7 d,运用免疫组织化学染色和qRT-PCR方法,通过检测I组、LG组和HG组法氏囊VP3免疫阳性细胞表达确定IBDV的增殖变化,同时检测了法氏囊促炎细胞因子IL-1βmRNA、IL-6 mRNA、TNF-ɑmRNA表达变化,趋化因子IL-8 mRNA、CCL19 mRNA、CCL5 mRNA以及纤维相关因子TGF-β mRNA、MMP9 mRNA相对表达,发现HG组和LG组法氏囊VP3免疫阳性细胞分布较I组少,检测平均光密度值,HG组和LG组显著低于I组(P<0.05),即Ghrelin添加抑制法氏囊内VP3免疫阳性细胞表达;HG组和LG组法氏囊较I组显著下调IL-1β mRNA、IL-6 mRNA、TNF-ɑ mRNA的表达(P <0.05);HG组和LG组法氏囊IL-8 mRNA、CCL19 mRNA、CCL5 mRNA表达较I组显著下降(P < 0.05);TGF-β mRNA、MMP9 mRNA在HG组和LG组法氏囊表达同样较I组显著下降(P<0.05),推测Ghrelin通过抑制上述细胞因子表达从而减轻雏鸡法氏囊损伤。
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