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目的本研究旨在探讨RIP3基因在结直肠癌组织中的表达及其与临床病理指标之间的关系,并进一步探查其在结直肠癌细胞中发挥的功能,有助于揭示结直肠癌发生发展的分子生物学机制。研究方法1.采用实时定量荧光PCR(Real-time PCR)、蛋白印记法(Western blot)检测RIP3在结直肠癌组织及其配对正常膜黏组织中mRNA及蛋白表达差异。2.采用免疫组织化学(Immunohistochemistry)检测结直肠癌及其配对正常黏膜组织RIP3基因的蛋白表达水平,并通过Kaplan-Meier及Cox比例风险模型分析RIP3在结直肠癌中的表达差异与患者术后生存率、复发率之间的关系。3.通过构建RIP3基因过表达质粒,体外转染结直肠癌细胞。研究RIP3过表达对结直肠癌RKO细胞的细胞增殖、平板克隆集落形成、侵袭与转移、诱导凋亡等生物学功能的影响。探讨过表达RIP3基因对结直肠癌细胞生物学功能的影响。结果1.Real-time PCR结果显示肿瘤组织中RIP3 mRNA表达水平低于正常组织2倍以上的达60.5%(23/38)。Western blot结果提示RIP3蛋白在结直肠癌组织中的表达低于配对正常组织中的表达。2.免疫组织化学结果显示RIP3表达率与患者肿瘤大小(P=0.027),肿瘤远处转移(P=0.016)与AJCC分期(P=0.002)高度相关。Kaplan-Meier和Cox比例风险模型显示RIP3阴性表达病例的总生存率及无病生存率均明显低于RIP3阳性表达病例(P=0.004,P=0.015)。3.体外细胞功能试验发现,结直肠癌RKO细胞过表达RIP3能显著抑制细胞的增殖、集落形成、侵袭与转移能力,通过流式细胞技术进一步分析发现RIP3过表达细胞凋亡比例明显升高。结论1.结直肠癌中RIP3 mRNA及蛋白表达水平较正常配对黏膜上皮组织表达显著降低。2.RIP3表达降低与一系列临床病理指标,如肿瘤大小、肿瘤远处转移与AJCC分期呈高度相关,是患者总生存率及无病生存率的有效预测因子。3.过表达RIP3能明显抑制RKO细胞增殖、集落形成、侵袭与转移,并诱导细胞凋亡。提示RIP3可能是结直肠癌新的抑癌基因,对判断预后、研究新型靶向治疗药物等临床应用提供新的可能性。