祛瘀解毒法对血瘀蕴毒型子宫内膜异位症卵泡液及颗粒细胞TNF-α、IL-6的研究

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目的:观察祛瘀解毒颗粒结合辅助生殖技术(ART)治疗血瘀蕴毒型子宫内膜异位症不孕的疗效并探讨其作用机理,试图开辟中医药治疗EM不孕的新思路,为临床有效治疗该病提供依据。方法:临床研究:60例子宫内膜异位症(EM)不孕患者随机分为治疗组和对照组,每组30例。治疗组有20例口服祛瘀解毒颗粒结合氯米芬(CC)促排卵+宫腔内人工授精(IUI);另外10例口服祛瘀解毒颗粒同时行IVF-ET。对照组有20例单纯给CC促排卵+IUI,另外10例行IVF-ET。观察治疗前后血瘀蕴毒证候积分变化、妊娠率、免疫及内分泌学相关指标、血清和卵泡液TNF-α、IL-6含量以及卵巢颗粒细胞TNF-αmRNA、IL-6mRNA的表达情况。实验研究一:40例EM模型大鼠随机分为试验组、观察组各20例,另取20只大鼠只牵拉子宫作为空白组。试验组每天给予祛瘀解毒颗粒溶于2ml生理盐水灌胃,观察组和空白组均给予2ml生理盐水,连续灌胃3周。末次给药后24h各组大鼠均给予人绝经后促性腺激素(HMG)50IU腹腔注射,48h后给予人绒毛膜促性腺激素(HCG)100IU/100g,14~16h后处死大鼠收集卵细胞及颗粒细胞团,观察优质卵细胞数目及优质卵细胞率,采用逆转录聚合酶链反应(RT-PCR)法检测卵巢颗粒细胞TNF-αmRNA、IL-6mRNA表达。实验研究二:配制不同的培养液,对20只小鼠超排卵共收集189枚2-细胞鼠胚分别放入各组培养液进行培养。其中治疗组培养液为P-1胚胎培养液加10%SSS加10%治疗组EM患者卵泡液;对照组为培养液P-1胚胎培养液加10%SSS加10%对照组EM患者卵泡液;空白组培养液为P-1胚胎培养液加10%SSS加10%空白组人卵泡液。每日在显微镜下观察小鼠胚胎情况。结果:1.祛瘀解毒颗粒能够有效改善患者血瘀蕴毒证候,提高妊娠率,降低EMAb的阳性率及CA125水平,改善内分泌状态,降低患者血清及卵泡液TNF-α、IL-6的含量,降低卵巢颗粒细胞TNF-αmRNA、IL-6mRNA的表达,效果明显优于对照组(P<0.05)。2.试验组大鼠优质卵细胞数目、优质卵细胞率明显高于观察组(P<0.05),颗粒细胞TNF-αmRNA、IL-6mRNA表达明显低于观察组(P<0.05)。3.小鼠2-细胞胚胎在治疗组及空白组培养液中发育到8-细胞期、桑葚胚及囊胚及优质胚胎的比率均明显高于对照组(P<0.05)。结论:祛瘀解毒颗粒可以改善血瘀蕴毒症候,提高EM不孕患者妊娠率,是治疗血瘀蕴毒型子宫内膜异位症的有效药物。推测其作用机理可能与调节免疫功能,改善内分泌状态,降低卵泡液TNF-α、IL-6水平及颗粒细胞TNF-αmRNA、IL-6mRNA表达等有关,通过旁分泌或(和)自分泌方式直接或间接参与卵巢功能的局部调节,改善卵子生存的内环境,提高卵细胞质量,减少对胚胎的毒性作用,从而提高EM患者妊娠率。
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