论文部分内容阅读
目的:1.构建PCB118持续低浓度损害特点的大鼠甲状腺模型;2.观察PCB118对大鼠甲状腺形态及功能的影响;3.探讨PCB118诱导甲状腺细胞功能障碍的可能机制。方法:1.将PCB118溶于玉米油,配成相应浓度的PCB118玉米油溶液,用于大鼠腹腔注射(给药容积0.5m L/kg)。选取40只清洁级健康成年雄性Wistar大鼠,体重(200±10)g,按PCB118给予剂量随机分为溶剂对照组(0μg/kg/d)、低剂量组(10μg/kg/d)、中剂量组(100μg/kg/d)、高剂量组(1000μg/kg/d)4组,每组各10只,每周连续给药5天(每天1次),每日称重后绘制大鼠周龄体重生长曲线,造模13周后心脏采血处死,立即取出甲状腺组织,按实验要求分别保存。血样经4℃离心后分离血清,按需分装后于-70℃冻存。2.取大鼠一侧甲状腺组织经4%多聚甲醛固定后石蜡包埋,连续切片后进行HE染色,光镜下观察甲状腺病理结构变化并拍照。3.取1mm3大小甲状腺组织,用5%戊二醛-1%锇酸双重固定,经块染、脱水、浸渍、包埋、聚合后,超薄切片,透射电镜下观察大鼠甲状腺超微结构变化并拍照。4.采用放射性免疫法测定大鼠血清FT3、FT4、TSH、TG、TGAb及TPOAb水平,参照相应RIA分析试剂盒说明书进行。5.提取甲状腺组织总RNA后,RT-q PCR方法检测大鼠甲状腺组织NIS、TG、TPO、AKT、Fox O3a m RNA表达变化。6.提取甲状腺组织总蛋白后,Western blotting方法检测大鼠甲状腺组织AKT、p-AKT及p-Fox O3a蛋白表达变化。结果:1.腹腔PCB118注射给药后,实验组与对照组比较,大鼠行为无明显异常改变,正常摄食、饮水,无明显腹泻。各组间体重无明显差异(P>0.05)。2.光镜下对照组大鼠甲状腺滤泡腔完整,为单层立方上皮,腔内充满均匀胶质。各实验组均可见甲状腺组织增生、滤泡扩张、滤泡腔塌陷、上皮脱落、胶质缺失、间质纤维化、小血管增生及纤维素样坏死等,损伤程度随着PCB118剂量的增加而明显加重。3.透射电镜下对照组甲状腺细胞顶端膜微绒毛丰富、胞质中内质网排列整齐、紧密,线粒体嵴清晰可见,形态正常;各实验组甲状腺滤泡上皮细胞核周间隙增加,内质网扩张伴空泡化,线粒体肿胀,部分伴空泡化、线粒体嵴消失、密度下降,损伤程度亦随PCB118剂量的增加而明显加重。4.随着PCB118剂量增加,大鼠血清FT3、FT4、TSH、TG浓度均逐渐降低,高剂量组FT3浓度明显低于对照组和低剂量组(P<0.05);各实验组血清FT4、TSH浓度均明显低于对照组(P<0.05);中、高剂量组血清TG水平明显低于对照组(P<0.05)。与对照组比较,低、中剂量组血清TGAb、TPOAb浓度显著升高(P<0.05);5.与对照组比较,甲状腺组织NIS和TG m RNA表达水平在中、高剂量组明显减低(P<0.05),但在低剂量组则无明显改变。与低剂量组比较,中、高剂量组TG m RNA明显减低,差异有统计学意义(P<0.05)。与对照组比较,中剂量组甲状腺组织TPO m RNA表达水平明显上升(P<0.05),高剂量组TPO m RNA表达水平明显低于中剂量组(P<0.05)。6.(1)与对照组比较,甲状腺组织AKT m RNA表达水平在高剂量组明显升高(P<0.05),但在低、中剂量组则无明显改变。各实验组甲状腺组织Fox O3a m RNA表达水平与对照组比较无明显改变。(2)与对照组比较,甲状腺组织AKT蛋白表达水平在中、高剂量组明显升高(P<0.05),但在低剂量组则无明显改变;p-AKT蛋白表达仅在高剂量组明显升高(P<0.05);各实验组甲状腺组织p-Fox O3a蛋白表达与对照组比较均明显升高(P<0.05)。结论:1.慢性低浓度PCB118持续暴露可造成大鼠甲状腺组织形态结构异常及细胞功能障碍,并存在一定剂量效应关系;2.慢性低浓度PCB118可诱导甲状腺自身免疫反应,导致血清甲状腺自身抗体水平增加;3.慢性低浓度PCB118可引起甲状腺激素重要功能基因NIS及TG m RNA表达减低,亦存在一定剂量效应关系;4.慢性低浓度PCB118可以激活PI3K/AKT通路,促使Fox O3a磷酸化水平增加。