【摘 要】
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本试验以中国美利奴细毛羊(军垦型)40只为研究对象,利用同期发情处理、半定量RT-PCR、荧光定量RT-PCR、HE染色和免疫组织化学等方法,探究绵羊grb7基因的表达及对胚胎附植的影
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本试验以中国美利奴细毛羊(军垦型)40只为研究对象,利用同期发情处理、半定量RT-PCR、荧光定量RT-PCR、HE染色和免疫组织化学等方法,探究绵羊grb7基因的表达及对胚胎附植的影响。试验结果如下:繁殖季节里利用孕酮海绵栓与PMSG结合的方法探究石河子地区绵羊同期发情,可以使总发情率达到85%以上。具体操作:任意选取同一天放置孕酮海绵栓,12天后撤栓并注射PMSG 330 IU,自撤栓后第24 h开始至第72 h截止,每间隔12 h试情一次,观察母羊发情情况,记录发情数,统计分析撤栓后24 h-72 h的发情率。通过组织表达谱检测,结果表明,grb7在21 d怀孕母羊的心脏、皱胃、大肠、小肠、瘤胃、下丘脑、大脑、小脑等组织均未检测出表达,在输卵管、肾脏、子宫体、卵巢、垂体、脾脏及膀胱等组织出现特异性表达,其中在输卵管、子宫体、卵巢和垂体等与生殖密切相关的组织相对表达量较高,提示grb7可能在母羊妊娠过程中发挥重要作用。实时荧光定量PCR结果显示,从绵羊妊娠第9d至25d阶段,grb7在母羊子宫内膜组织的表达量呈逐渐上升趋势,孕羊grb7的表达量均显著高于同一时间点同期发情的未孕母羊。grb7在胚胎附植期绵羊子宫内膜中的m RNA表达呈动态时空变化,提示grb7可能在绵羊早期胚胎附植中发挥着重要的作用。HE染色和免疫组织化学研究表明,胚胎附植期绵羊子宫内膜中GRB7蛋白主要定位于子宫内膜上皮,且呈现动态时空变化。本试验结果表明grb7基因在绵羊早期胚胎附植中发挥着重要的作用。但GRB7蛋白在附植过程中分子调控网络及通路的作用机制尚未完全清楚,后续试验需要进行怀孕25 d之后的子宫内膜和孕体方面研究。
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