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本实验利用分枝杆菌M1与M2切除植物甾醇C17位边链，制备ADD与AD，主要研究内容包括以下几个方面： 1．分析测定方法的建立：薄层层析法，以乙酸乙酯:石油醚（6:4）作为展层剂，以硅胶作为固定相，主要用于定性分析底物与产物；紫外吸光光度法，采用双波长（254nm与298nm）检测，主要用于快速定量分析ADD与AD；根据高效液相色谱与薄层层析相同的工作原理，采用硅胶柱，在薄层层析分析法基础上建立了高效液相色谱法，同时建立了两种定量测定方法：标准曲线法与内标法，高效液相色谱法主要用于准确定量测定产物ADD与AD；气相色谱法，采用FID检测器和大口径毛细管柱，主要用于分析底物甾醇，根据FID的工作原理，确定了各物质的相对校正因子，气相色谱法可用于定量分析底物的四种成份和产物AD（D）在发酵液中的相对含量。 2．生产菌种的性质：实验中发现菌体在培养过程中随着营养物质的消耗，细胞形态发生有规律的变化，从长杆状逐渐变为短杆状，最后变为球形；这种形态分化与菌体降解甾醇的活性有一定相关性：当菌体为长杆状时转化活性很高；当菌体变为短杆状时转化活性明显下降；菌体变为球形时转化活力基本消失。两株实验菌M1与M2在菌体形态上没有区别，但在生产能力上有较大差别，根据菌株对底物转化能力的大小，选择M2作为主要研究对象。 3．工艺参数的确定：详细研究了一级转化法与二级转化法两种工艺。一级转化法中：斜面种子用MYC/S2培养基29℃恒温培养60h，冷冻保藏不超过20d，转接发酵培养基MYC/02的接种量为7％；二级转化法中：液体种子的接种种龄为35h～40h，以7％的接种量接种发酵培养基MYC/02，并优化了发酵培养基的培养条件：pH=7.0、温度29℃、保证充足的溶氧。 4．投料的方式：通过对乙醇法、Tween80法、环糊精法及超声波法等的试验，确定以Tween80乳化底物的投料方式，即用0.5％～1.0％的Tween80悬浮甾醇，在120℃高温中乳化，然后用于配制发酵培养基MYC/02。 5．5L发酵罐转化工艺优化：在摇瓶实验的基础上，进行了5L罐扩大培养实验，在培养过程中保持转化温度为29℃，流加10％NaOH与2M盐酸控制pH为7.0，通过调节空气流量与搅拌转速保持充足的供氧。5L罐转化结果（转化168h）：①投料量为0.3％，底物转化率为100％，AD（D）产率为90％以上；②投料量为0.5％，底物转化率为95％左右，AD（D）产率为85％左右；③投料量为1.0％，底物转化率为50％～60％，产物生成率在50％左右。