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1.比较含红芪和含黄芪复芪止汗汤含药血清对SAMP8鼠脾淋巴细胞免疫功能的影响目的:比较含红芪和含黄芪的复芪止汗汤含药血清与SAMP8鼠脾淋巴细胞共培养后对其免疫功能的影响。方法:将90只清洁级健康昆明种小鼠,雌雄各半,体质量18~22 g,随机分为红芪复芪止汗水提物组、黄芪复芪止汗水提物组和空白血清组(生理盐水组),每组30只。实验组分别灌胃含红芪和黄芪的复芪止汗水提物,空白血清组则灌胃相同剂量的生理盐水,灌胃量为0.4 ml/(20 g·d),连续灌胃14天,每日1次,末次灌胃2 h后眼球摘除取血,收集同组血清,制备含药血清。将10只SAMP8鼠和昆明种小鼠颈脱臼处死,无菌分离脾脏,制备各组脾淋巴细胞悬液。通过MTT比色法检测各组含药血清刺激SAMP8鼠脾淋巴细胞后的增殖能力,确定最佳作用浓度及培养时间。根据最佳浓度和时间将各组含药血清与SAMP8鼠脾淋巴细胞悬液共培养,检测含红芪和含黄芪复芪止汗含药血清对SAMP8鼠脾淋巴细胞ConA诱导增殖能力,对CD3~+CD4~+、CD3~+CD8~+T淋巴细胞亚群分化,对培养上清液中IL-2的表达,对T淋巴细胞在PI3K mRNA的表达的影响。结果:当含药血清浓度为40%,作用时间为48 h时对SAMP8小鼠的脾淋巴细胞促进增殖的作用最强;且红芪组在自身增殖、ConA诱导增殖方面作用优于黄芪组(P<0.05);含红芪和黄芪的的复芪止汗CD3~+CD8~+T淋巴细胞分化百分比均升高,CD4~+/CD8~+比值均降低,含黄芪的复芪止汗CD3~+CD4~+T淋巴细胞分化百分比降低;含红芪和黄芪复芪止汗方含药血清均可增加SAMP8鼠脾淋巴细胞悬液培养上清液中IL-2的分泌;红芪和黄芪复芪止汗复方均可增加PI3K mRNA的相对表达量,且红芪组明显优于黄芪组(P<0.05)。结论:含红芪和黄芪的复芪止汗含药血清均对SAMP8鼠脾淋巴细胞免疫功能一定的调节作用,通过发挥其免疫调节作用起到抗衰老的作用。2.含红芪和黄芪复芪止汗复方对SAMP8鼠脾淋巴细胞免疫调节作用的比较研究目的:比较含红、黄芪的复芪止汗复方作用于SAMP8鼠后对其脾淋巴细胞免疫功能影响。方法:昆明种青龄小鼠10只为正常对照组,SAMP8鼠40只。将SAMP8鼠随机分为四组即含红芪和含黄芪的复芪止汗组(复红组、复黄组)、生理盐水对照组、胸腺肽阳性对照组,每组10只。实验组分别灌胃含红芪和黄芪的复芪止汗水提物,胸腺肽组灌胃胸腺肽溶液,每日4.6 mg/kg,空白血清组则灌胃相同剂量的生理盐水,灌胃量为0.4 ml/(20 g·d),连续灌胃14天,每日1次,末次灌胃2h后眼球摘除取血,收集同组血清。SAMP8鼠和昆明种青龄小鼠颈脱臼处死,无菌分离脾脏,制备SAMP8鼠和青龄鼠脾淋巴细胞悬液。流式细胞术检测复芪止汗汤复方对快速老化小鼠8 CD3~+CD28~+、CD3~+CD152~+T淋细胞亚群分化百分比的影响;通过ELISA法检测各组小鼠血清中IFN-γ的分泌量;蛋白印迹法检测快速老化小鼠8脾淋巴细胞PI3K蛋白表达量,实时荧光定量法检测脾淋巴细胞在PI3K mRNA的表达的影响。结果:含红芪和黄芪复芪止汗复方均可改善快速老化小鼠8 CD28~+、CD152~+T淋巴细胞亚群百分比(P<0.05);红芪复芪止汗汤和黄芪复芪止汗汤均可增加快速老化小鼠8血清中IFN-γ的分泌量(P<0.05);均可上调快速老化小鼠8脾淋巴细胞PI3K蛋白和PI3K mRNA的表达量(P<0.05),且红芪组在提高PI3K mRNA的表达量时红芪组优于黄芪组。结论:含红芪和黄芪的复芪止汗复方均可通过调节SAMP8鼠脾淋巴细胞免疫功能进而发挥抗免疫老化的作用,红芪复芪止汗方和黄芪复芪止汗方作用相似。