羟基红花黄色素A对大鼠局灶性脑缺血后血管新生的初步研究

来源 :中国协和医科大学 北京协和医学院 中国医学科学院 清华大学医学部 | 被引量 : 0次 | 上传用户:cbiba123
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目的: 随着人们生活水平的提高,疾病谱的变化,人口老龄化的加剧,缺血性脑卒中(即脑缺血)已经成为一种严重影响人们生活质量的疾病。而羟基红花黄色素A(hydroxysafflor yellow A,HSYA)是传统活血化瘀中药红花的主要活性成分之一,本研究主要探讨其对局灶性脑缺血后血管新生的影响并对其机制做初步探讨。 方法: 1.建立大鼠大脑中动脉阻塞(Middle cerebral artery occlusion,MCAO)模型,分为HSYA(48mg/kg)治疗组、模型组和假手术组(n=3)。于脑缺血后第1天、3天、6天断头处死动物,苏木素伊红(HE)染色进行形态学观察;利用免疫组化法检测其脑缺血侧皮质血管内皮细胞生长因子(VEGF)、Ⅷ因子、缺氧诱导因子1α(HIF-1α)的表达;缺血后3天组同时以TUNEL法检测梗死皮层神经元凋亡。 2.取MCAO后24小时作为选择时间点,动物分组同上,应用RT-PCR法检测HSYA对缺血侧皮层中HIF-1αmRNA和VEGF mRNA表达的影响,结果采用图像分析软件进行半定量分析。 3.将处于对数生长期的ECV304细胞接种于Transwell小室上层(密度5×105个/ml),以20%NCS作为诱导血清,分为HSYA组(1×10-3mol/1)及模型组(n=3),置于37℃、5%CO2,1%O2培养箱中培养12h、18h、24h、30h、36h。到时间点后,取出小室,染色,擦去滤膜上层细胞,在显微镜下观察,计数滤膜下表面的迁移细胞数目。 结果: 1.HSYA组大鼠的脑组织形态学改善明显,缺血侧皮层血管密度增加,同时缩小梗死灶,减少神经细胞的变性和坏死。HYSA可延长MVD高水平时相,与模型组在MCAO后144h出现显著性差异(P<0.05)。HSYA可使MCAO后的VEGF表达升高,与相同时间点模型组比较存在显著差异(P<0.01),并使缺血后期(144h)VEGF表达的下降减缓。模型组HIF-1α表达在MCAO后24h最高,
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