饰胶蛋白基因cDNA克隆、表达与生物活性研究

来源 :西安交通大学 | 被引量 : 0次 | 上传用户:gdcjr
下载到本地 , 更方便阅读
声明 : 本文档内容版权归属内容提供方 , 如果您对本文有版权争议 , 可与客服联系进行内容授权或下架
论文部分内容阅读
饰胶蛋白(Decorin)是富含亮氨酸的小分子蛋白聚糖基因家族中的一种.为了更好地研究饰胶蛋白的分子生物学功能及其开发应用前景,该研究首先根据GenBank中AF138300记载的Decorin序列设计了一对扩增Decorin基因全序列引物和一对扩增p154-260肽片段基因cDNA引物;采用RT-PCR技术从人胎盘组织中获得饰胶蛋白全长基因cDNA和p154-260肽片段cDNA,并分别克隆到pUC19载体(含有BamHI和EcoRI酶切插入位点)中,采用Sanger双脱氧未端终止 法测序,所测定的序列与GenBank中AF138300记载的序列完全一致.为了获得Decorin蛋白和p154-260肽,研究人员选择了表达载体pGEX-4T-1.将测序正确的饰胶蛋白基因全cDNA和p154-260肽片段cDNA插入pGEX-4T-1表达载体交转染感受态大肠杆菌JM109中,经BamHI和EcoRI 双酶切鉴定正确后,挑取工程菌阳性克隆;工程菌经IPTG低温(26℃)诱导,表达产物经SDS-PAGE分析显示有GST-Decorin融合蛋白的表达;进一步分析表达的融合蛋白质(GST-Decorin)分子量准确无误,由此推断克隆的饰胶蛋白基因所表达的蛋白质(Decorin)分子量与理论值(39.6KD)一致.将表达后的菌体经超声波裂解法处理,分别对上清液和沉淀进行SDS-PAGE分 析.该研究成功地克隆了Decorin基因cDNA并表达了饰胶蛋白,表达的产物具有饰胶原的活 性.具有广阔的开发应用前景.
其他文献
随着社会的进步发展,人们对美食的需求从简单的满足果腹上升到了追求精神的享受.人们越来越多的关注烹饪美学对菜肴的指导作用.烹饪美学的相关知识已经完全融入到现代饮食业
学位
油页岩灰渣是油页岩在工业制油、燃烧以及发电等化工过程中产生的废料。目前,我国油页岩灰渣中除少部分被利用外,大部分被露天堆积。油页岩灰渣是多种矿物组成的含水铝硅盐矿物
五代后梁画家荆浩,善引水弄墨,舞北方大山大水之雄峻;亦擅长以文为戏,以传奇笔法,将幻想故事与现实生活结合,为世人留下宝贵的绘画理论——《笔法记》.荆浩的山水创作绘画思
期刊
学位
在后基因组时代,生命科学的中心任务是阐明基因组所表达的真正执行生命活动的全部蛋白质的表达规律和生物功能。蛋白质与配体相互作用以及蛋白质结构与功能之间的关系是后基因
该文系统地论述了高炉内焦炭的降阶机理,对现行高炉用焦炭质量检测方法进行了综合评释.在此基础上提出一种焦炭高温冶金性能检测装置.与常规装置相比,该装置能较好地模拟高炉
我国的铜矿资源相对贫乏,未开采的铜矿资源特点是富矿少、贫矿多、原矿品位低、采选困难,铜冶炼过程中产渣量大。目前世界上工业铜渣贫化的方法主要有火法贫化、炉渣选矿和湿法
什么是“时尚”?在国内,它不是一门学科,也不是一门专业,但现在已经成为一门行业,丰富而多元.作为一个概念词,已经深入人心.然而任何一种关于时尚的传播形式和共享体验,以撼
该文通过无钟布料模型实验,研究无钟高炉布料的基本布料规律,并在此基础上建立无钟布料料面形状数学.模型实验在是按鞍钢十一高炉(2580M1/5比例缩尺建立的实验装置上进行.完