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饰胶蛋白(Decorin)是富含亮氨酸的小分子蛋白聚糖基因家族中的一种.为了更好地研究饰胶蛋白的分子生物学功能及其开发应用前景,该研究首先根据GenBank中AF138300记载的Decorin序列设计了一对扩增Decorin基因全序列引物和一对扩增p154-260肽片段基因cDNA引物;采用RT-PCR技术从人胎盘组织中获得饰胶蛋白全长基因cDNA和p154-260肽片段cDNA,并分别克隆到pUC19载体(含有BamHI和EcoRI酶切插入位点)中,采用Sanger双脱氧未端终止 法测序,所测定的序列与GenBank中AF138300记载的序列完全一致.为了获得Decorin蛋白和p154-260肽,研究人员选择了表达载体pGEX-4T-1.将测序正确的饰胶蛋白基因全cDNA和p154-260肽片段cDNA插入pGEX-4T-1表达载体交转染感受态大肠杆菌JM109中,经BamHI和EcoRI 双酶切鉴定正确后,挑取工程菌阳性克隆;工程菌经IPTG低温(26℃)诱导,表达产物经SDS-PAGE分析显示有GST-Decorin融合蛋白的表达;进一步分析表达的融合蛋白质(GST-Decorin)分子量准确无误,由此推断克隆的饰胶蛋白基因所表达的蛋白质(Decorin)分子量与理论值(39.6KD)一致.将表达后的菌体经超声波裂解法处理,分别对上清液和沉淀进行SDS-PAGE分 析.该研究成功地克隆了Decorin基因cDNA并表达了饰胶蛋白,表达的产物具有饰胶原的活 性.具有广阔的开发应用前景.