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氧化应激与人体多种疾病密切相关,其中包括阿尔茨海默综合症(Alzheimer Disease,AD),帕金森综合症(Parkinson’s Disease,PD)及亨廷氏舞蹈症(Huntington’s Disease,HD)三大神经退行性疾病。丙烯酰胺是一种神经毒素,可诱导机体氧化应激损伤,常存在于油炸类食品中,而该类食品又是中国传统美食不可或缺的一部分,因此,开发一种能够有效抑制丙烯酰胺氧化损伤的天然抗氧化剂具有重要的意义。酸枣仁(Semen Ziziphi Spinosae,SZS)作为中国传统中药,具有多种药理作用,如镇静安眠和降压等。最新研究表明,酸枣仁黄酮具有明显的抗氧化活性,是一种潜在的天然抗氧化剂,具有良好的开发前景,但目前对酸枣仁黄酮的抗氧化活性与结构之间的关系及其对细胞的氧化损伤保护作用机制研究尚未见系统报道。因此,本课题采用乙醇加热回流提取法结合多种色谱技术从酸枣仁中制备黄酮化合物,并利用HPLC-MS/MS对其进行质谱分析。采用多种体外抗氧化活性研究方法考察酸枣仁黄酮的抗氧化活性,并研究不同化合物结构与抗氧化活性之间的关系。以N1E-115细胞为模型,通过考察细胞活力、活性氧、还原型谷胱甘肽含量、线粒体膜电位、丙二醛水平及相关蛋白表达水平等方面,深入研究酸枣仁黄酮对丙烯酰胺诱导的N1E-115细胞氧化损伤的保护作用及其相关机制,主要研究成果如下:(1)采用乙醇加热回流提取法,并结合多种色谱技术得到6种酸枣仁黄酮化合物。利用HPLC-MS/MS法确认其结构,确定6种化合物分别为斯皮诺素(S)、异牡荆素-2’’-O-β-D-吡喃葡萄糖苷(IVG)、6’’’-阿魏酰斯皮诺素(6-FS)、6’’’-对香豆酰斯皮诺素(6-CS)、异牡荆素(IV)及当药素(ST)。(2)利用多种体外抗氧化活性研究方法研究酸枣仁黄酮化合物抗氧化活性,并分析讨论其抗氧化活性与结构之间的构效关系。体外抗氧化实验结果如下:总还原力IV>6-CS>IVG>6-FS>ST>S;ABTS自由基清除能力6-CS>IV>6-FS>IVG>ST>S;DPPH自由基清除能力6-CS>6-FS>IV>IVG>ST>S;超氧阴离子自由基清除能力6-CS>IV>6-FS>IVG>ST>S;脂质过氧化物清除能力6-CS>IV>6-FS>IVG>S>ST。结果显示,6种酸枣仁黄酮都表现出明显的抗氧化能力。并且在不同指标上表现出不同的强度,一般规律为:化合物的抗氧化能力与结构中羟基化水平成正比,与糖基化水平成反比,且A环的邻位取代-OH能使抗氧化性显著增强,C-6’’’位阿魏酰基与对香豆酰基能够显著提高抗氧化性。(3)以N1E-115细胞为模型,利用分子荧光探针,化学发光法探究6-CS对丙烯酰胺诱导的细胞氧化损伤的保护作用。结果显示,丙烯酰胺可显著诱导N1E-115细胞氧化损伤(5 mmol/L丙烯酰胺处理24 h,细胞活力值降为64.51%),而10μmol/L,20μmol/L和50μmol/L 6-CS均可显著抑制丙烯酰胺诱导的细胞氧化损伤(细胞活力值分别为73.21%,80.12%和89.05%;此外,丙烯酰胺可显著诱导N1E-115细胞发生活性氧累积、线粒体膜电位下降、还原型谷胱苷肽含量下降等,而10μmol/L,20μmol/L和50μmol/L的6-CS均可通过显著降低细胞内活性氧水平,恢复胞内还原型谷胱甘肽水平、线粒体膜电位水平,清除胞内丙二醛达到保护细胞的作用。(4)Western Blot实验结果表明,丙烯酰胺能够通过诱导N1E-115细胞的氧化应激来促进LC3II/I和p62的蛋白表达,并抑制Tim23和Bcl-2/Bax蛋白表达,进而诱导细胞自噬及细胞凋亡。10μmol/L,20μmol/L和50μmol/L 6-CS均可以有效恢复LC3II/I,Bcl-2/Bax的蛋白水平及Tim23的蛋白表达水平。由此可见,6-CS对丙烯酰胺诱导的细胞自噬及细胞凋亡有显著的抑制作用,进而实现对丙烯酰胺致细胞氧化损伤的保护作用。