目的本实验主要目的在于利用基因转染方式,治疗常规药物疗效无效或当前的临床手法较难达到治愈效果等病症,予以提出实验依据,并进一步探讨VEGF165基因在组织间转染后的表达水平及对周围组织的影响。同时观察在一定放射量的作用下对周围组织器官的损伤程度,以评估基因治疗前后,损伤组织的变化。方法1.人源VEGF165质粒的制备,应用逆转录-聚合酶链反应从人卵巢癌中扩增出目的基因VEGF165序列的cDNA,并将VEGF165的PCR产物经BamHI和XbaI双酶切后连接到真核表达载体pcDNA4-HisMax-C中,然后转化感受态大肠杆菌DH5α,实行筛选扩增,并将重组质粒进行基因测序鉴定,最终转染大鼠咬肌组织检测其对组织的影响。2.放射损伤动物模型的建立,主要利用直线加速器作为放射源,总剂量为40Gy,分8次完成,观察放射剂累计量到达后,大鼠的临床体征,照射区的皮肤,咬肌软组织的病理改变。3.利用光镜、电镜等手段,观察大鼠咬肌的细胞组织病理改变及咬肌超微结构的变化。应用RT-PCR检测放射后TGF-β1 mRNA的变化及h-VEGF165基因转染后,大鼠咬肌内其mRNA的基因表达和内源性VEGF-A的mRNA水平变化。结果1.实验证明成功从人卵巢癌中克隆VEGF165基因,并将其连接至pcDNA4-HisMax-C载体中,经测序结果表示pcDNA4-HisMax-C/VEGF165真核表达载体构建成功。2.经放疗后的咬肌组织,在光镜下发现毛细血管内皮严重肿胀,大量炎细胞浸润,组织周围有大量红细胞及白细胞,表示经放疗作用后组织已有一定程度的病理损伤,证实动物放疗模型建立成功。3.在RT-PCR检测中表示,放疗后的TGF-β1 mRNA表达水平较正常组织高；VEGF165转染后,大鼠内源性VEGF-A呈现较高表达。结论利用大鼠咬肌给予40Gy剂量的放射线照射,成功的模拟患者颌面部在接受大剂量放疗后的临床变现及组织病理学变化。应用基因重组技术成功构建了pcDNA4-HisMax-C/VEGF165真核表达载体并转染至大鼠咬肌组织内,在光镜、电镜和分子生物学检测下证实其具有对血管内皮有效的修复作用。