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F-box蛋白是一类含有F-box基序(motif)，在泛素介导的蛋白质水解过程中具有底物识别特性的蛋白质家族。通常，F-box蛋白通过自身的F-box基序与Skp1结合，连接到SCF(Skp1-Cdc53-F-boxproteincomplex)复合体上。SCF由Skp1、一种Cullin(Cdc53)、Rbx1/Roc1/Hrt1和F-box蛋白家族中的某个成员组成。这类蛋白质在细胞时相转换、信号传导、发育等多种生理过程中都具有重要功能。本论文选择苜蓿丫纹夜蛾核多角体病毒(Autographacalifornicamulticapsidnucleopolyhedrovirus，AcMNPV)开放阅读框12(openreadingframe12,ORF12)(命名为Ac12基因)为研究对象，研究基因缺失对病毒在感染细胞中产生情况的影响。
Ac12基因位于AcMNPV基因组nt8958-nt9611之间，阅读框全长654bp，编码217个氨基酸，预计分子量25.4kDa。氨基酸序列分析发现Ac12基因在43-92个氨基酸处含有一个F-box基序。本文采用ET克隆的方法，在大肠杆菌DH10B细胞中成功实现了从AcMNPVBacmid基因组中敲除Ac12基因的F-box基序，并同时在该位点插入了氯霉素(Cm)基因。将经过转座带有绿色荧光蛋白基因(greenflucrescenceprotein，gfp)和多角体基因(polh)的重组Bacmid转染Sf9细胞，18h后荧光显微观察发现细胞中能够产生绿色荧光，出现荧光的细胞分布比较均匀。转染36小时后能够看到多角体比较均匀地分布于少量细胞中，72h后出现多角体的细胞数量增加。从重组Bacmid转染的Sf9细胞上清中收集的芽生型病毒粒子(buddedvirus，BV)，以MOI=5感染Sf9细胞，荧光显微观察和多角体显微观察结果与重组Bacmid转染Sf9细胞相似。重组Bacmid转染Sf9细胞，测定芽生型病毒粒子的滴度结果发现缺失Ac12基因中F-box基序的重组病毒滴度与野生型的病毒滴度相比较无明显变化。这些结果表明缺失Ac12基因中的F-box基序并不影响芽生型病毒粒子BV的产生，也不影响BV的感染性。Ac12基因对BV的产生是非必需的。