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目的:近年来,HIV感染人数呈逐年上升趋势,给输血安全带来极大的风险,同时伴随着假阳性结果对献血者的不良影响,但各血站没有统一的、成熟的选择试剂的方案,初筛阳性结果按照我国《全国艾滋病检测技术规范》(2004年版)的要求,也常常不能及时的得出确认结果,这些都是当前血站系统中亟待解决的问题。因此,本课题的根本目标,同时也是主要的创新之处,就是较系统的研究如何合理的选择HIV初筛试剂,研究及时确认HIV感染的新方案和策略,为安全输血和HIV的及时确认提供依据。本课题为卫生部艾滋病防治应用性研究项目(2006第34号)。内容:针对血站没有系统的选择HIV初筛试剂方案的问题,探讨只对国家标准品检测,是否就能够满足选择试剂的需要,以及本地区标本在试剂选择中的作用。针对WB确认过程中存在不确定结果的问题,利用积累了10年的资料和献血者标本,研究不确定结果的发生率,不同WB结果与ELISA实验中S/CO的关系。针对献血者HIV感染不能及时确认的问题,结合国外血液NAT检测的实际情况,对WB和NAT两种方法进行对比分析,从理论和实践两方面探讨及时确认HIV感染的新策略。方法:对本地区过去10年间,共326568份标本的HIV检测情况进行回顾性研究,积累了111份初筛阳性标本作为研究对象。采用质控血清、国家HIV抗体参考品和本地的初筛阳性标本作为检测对象,对市场上的8种试剂的孔间差、灵敏度、特异性等指标进行了综合评价,评估这些检测对象在试剂选择中的作用。用WB对初筛阳性标本进行确认,分析各结果所占的比例;WB结果分为三组:阳性组、阴性组、不确定组,比较各组结果与ELISA实验中S/CO的关系。按国家现行确认标准,3、6个月后,对不确定结果进行随访,再通过WB实验最终确认。利用敏感度和特异性较高的荧光PCR技术对上述初筛阳性标本进行检测,通过与WB和金标准的比较,分析NAT和WB对确认HIV感染的作用,提出确认新策略。结果:本地区无偿献血者中初筛阳性占3.4/万(111/326568)。8种ELISA抗-HIV试剂检测质控血清:S/CO值为1.520～2.876不等,均大于1,即灵敏度<2NCU/ml;孔间CV为2.30%～11.00%,均小于15%;对国家标准品的检测:阳性检出率均为100%(20/20),3种试剂的阴性检出率为100%(20/20),5种试剂为95%(19/20),1种试剂为90%(18/20),最低检出率均为3/6;8种ELISA抗-HIV试剂对111份本地区初筛阳性标本的检测结果是:阳性检出率均为100%(20/20),阴性标本检出率从76.9%(70/91)～93.4%(85/91)不等。WB对初筛阳性标本的检测:阳性占18.02%(20/111),阴性占73.87%(82/111),不确定占8.11%(9/111),其中P171份,P248份。20例WB阳性的S/CO值全部大于5,最高达20;WB阴性的S/CO<1.0的69份,在1～2.999之间的6份;WB不确定结果的S/CO<1.0的2份,在1.0～2.999之间的13份,在3.0～4.999之间的1份,提示S/CO<3.0时,阳性可能性较小。WB不同结果在ELISA实验中S/CO的比较:阳性组与阴性组比较t=15.21,P<0.001,显示两组在统计学上有显著差异;阳性组与结果不确定组比较t=13. 07,P<0.001,在统计学上有显著差异;不确定组与ELISA假阳性组比较t=2. 13,P>0.05,在统计学上没有显著差异,提示不确定结果可能为假阳性。在3、6个月后,随访9例不确定结果献血者,带型无变化,按国家标准判断为阴性,也是最终金标准结果。NAT检测初筛阳性标本:阳性占18.02%(20/111),阴性占91.98%(91/111),与金标准结果完全一致;WB与金标准比较,灵敏度100%,特异性90.11%。结论:只通过检测质控血清和国家参考品,来评价ELISA抗-HIV试剂,质量难分上下,但对本地区实际工作中的标本的检测结果均不相同,有一定差距,所以通过国家标准品和实际工作中的标本相结合,才能合理的挑选出适合本地区的抗-HIV初筛试剂。通过WB不同结果的S/CO值的分布和统计学分析,显示不确定结果实际是阴性的可能性大,且在初筛实验中S/CO小于3.0的也为阴性的可能性较大,故我们对这些结果要慎重处理,注意保密以免给献血者带来伤害,给采供血机构带来法律纠纷。WB作为一种常规应用的确认方法仍存在缺陷,即检测结果中存在较高比例的不确定结果,需3、6个月随访后方能确定,使无偿献血者个人、家庭、工作和生活承受巨大的压力,也给工作人员带来诸多不便。NAT的敏感性和特异性均好,可以考虑作为确认HIV的辅助手段。建议修正的HIV检测和确认方案:用两种抗-HIV ELISA试剂初筛,阳性标本用WB确认,阴性或阳性结果直接报告,不确定的结果,用NAT检测后,及时的报告出阴性或阳性结果,不必等6个月后的随访。