家蚕Bm-LOC778477蛋白的表达、纯化及亚细胞定位研究

来源 :浙江理工大学 | 被引量 : 0次 | 上传用户:Whoafraidwh0
下载到本地 , 更方便阅读
声明 : 本文档内容版权归属内容提供方 , 如果您对本文有版权争议 , 可与客服联系进行内容授权或下架
论文部分内容阅读
首次从构建的家蚕蛹cDNA文库中克隆分析得到一条基因,并将该基因命名为Bm-LOC778477。Bm-LOC778477基因的ORF长为564bp,编码187个氨基酸残基,该蛋白理论分子量和等电点分别为21.26kDa和8.94。Bm-LOC778477基因位于家蚕基因组连续框架Scaffold001541,由3个内含子和4个外显子组成,内含子/外显子切割位点的边界顺序符合Chambon法则。生物信息学分析表明,Bm-LOC778477基因位于W染色体,同时,该基因启动子区含有起始子等核心启动子元件。 构建了pGEX-4T-1-Bm-LOC778477重组质粒,转化于E.coliRosetta((DE3)感受态细胞,IPTG诱导重组菌表达,SDS-PAGE分析表明GST-Bm-LOC778477融合蛋白以包涵体形式存在。包涵体用8M尿素溶解,复性后的蛋白进行亲和层析,凝血酶酶切和再纯化。经质谱鉴定分子量正确的Bm-LOC778477的蛋白免疫新西兰大白兔制备多克隆抗体,多克隆抗体经ProteinA柱纯化,间接ELISA测定纯化后的抗体(1mg/ml)效价为1:6,400。 分析家蚕EST数据库,表明Bm-LOC778477基因在家蚕五龄幼虫第三天的血淋巴、家蚕五龄幼虫后端丝腺和蛹期有表达。利用免疫印迹技术在家蚕蛹中能检测到Bm-LOC778477蛋白,同时间接ELISA法检测表明,Bm-LOC778477蛋白在Bm5细胞中有明显的信号。免疫细胞化学表明,Bm-LOC778477蛋白在Bm5细胞的细胞质和细胞核中均有分布,然而,转染pEGFP-Bm-LOC778477的重组质粒于Bm5细胞表明,Bm-LOC778477-GFP融合蛋白主要分布于细胞核中。综上所述,以上结果为后续开展该蛋白的功能研究奠定了基础。
其他文献
请下载后查看,本文暂不支持在线获取查看简介。 Please download to view, this article does not support online access to view profile.
酪氨酸酶是一类结构复杂的氧化还原酶类,能够催化酪氨酸生成黑色素,普遍存在于微生物、植物以及哺乳动物中。酪氨酸酶具有多种特殊的催化活性,近年来在食品、医药、环保等领域应
阿尔茨海默症(Alzheimers disease,AD)是以智能衰退为特征的中枢神经系统退行性疾病,其以Abeta为主要成分的细胞外老年斑、细胞内神经元纤维缠结以及选择性神经元及突触丢失为
安慰,而惟一有的是一句责备。也许在当时,你们认为女儿长大了,懂得自我鼓励和自我安慰,可是你们明白吗?十八岁下掩盖着的是女儿的无助啊!对于这个分数,我愧对你们,但我自认没
期刊
摘要:生态课堂是以学生为主体,以强调每一个学生的需求、欲望和意识,兼顾学生的个性发展。生物课堂是结合现代课堂教学手段,实现教学与学生发展的真正统一的课堂。建立生态课堂能使学生成为学习的主人,在教师的引导下能自由开放地、独立自主地学习,提高生物学素养,实现人的全面发展、个性发展和终身发展。  关键词:生态课堂;教学;自主学习  中图分类号:G633.91 文献标识码:A 文章编号:1992-7711
热激蛋白(Heat Shock Proteins,HSP)又称热休克蛋白或应激蛋白(Heat Stress Proteins),是一组在进化上高度保守的、原核和真核生物中普遍存在的蛋白质。在热激、冷激、有机物、重金属、缺氧以及基因损伤、组织创伤、微生物感染等应激条件下,生物体内大部分正常蛋白质的合成和mRNA的转录被抑制,同时迅速合成一些逆境蛋白能够抵御不良环境。挪威鼠热激蛋白(Rattus no
以新鲜香菜为试材,以叶绿素含量及含水量为参考指标,在单因素试验的基础上,选择温度、营养液浓度、过氧化钙含量3个因素,利用Box-Behnken中心组合试验和响应面分析法,模拟了
小热休克蛋白家族成员在结构上变化很大,分子量可从12kD~43kD,它们具有一些共同的特点,包括:(1)在C端包含一个80~100个氨基酸的α晶体蛋白结构域:(2)低分子量;(3)能够形成大型低聚体:(
目的:从噬菌体7肽库中筛选与哇巴因特异性结合的短肽,并分析其生物学活性,为研究哇巴因与钠泵的相互作用及防治内源性哇巴因相关的原发性高血压奠定基础。 方法: (1)哇巴因
摘要:教学有效性指通过课堂教学使学生获得最大发展,是兼顾知识的传授、情感的交流、智慧的培养和个性塑造的过程。政治课堂要实现有效教学,与教师课前的有效备课、课堂中创建有效的学习氛围、激发学生的学习兴趣以及采取有效的教法等因素有极为密切的关系。  关键词:高中政治;教学有效性;方法  中图分类号:G633.2 文献标识码:A 文章编号:1992-7711(2017)07-0038  一、教师要进行有效