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目的 凝血因子Ⅺ(FⅪ)缺陷症为常染色体隐性遗传性疾病，曾被称为血友病C，患者出血症状轻重不定，FⅪ水平高低与出血程度并不成正比，很少有自发性出血。近年来的报道发现，该缺陷症的发生主要与FⅪ基因的突变有关。本文对一个遗传性FⅪ缺陷症家系进行FⅪ基因突变的分析，旨在探讨其分子发病机制。 方法 1、资料 先证者，女，20岁，因“妊娠待产”收住入院，既往无出血病史及关节、肌肉出血等症状，术前常规的凝血功能检测发现活化部分凝血活酶时间(APTT)延长为50.0s/35s，凝血酶原时间(PT)13.1s/12s，凝血因子检查发现凝血因子Ⅺ活性(FXI：C)为22.5％，其他如凝血因子Ⅷ活性(FⅧ：C)为205％，凝血因子Ⅸ活性(FⅨ：C)为90.9％，凝血因子Ⅻ活性(FⅫ：C)为90.2％。初步诊断为轻型FⅪ缺陷症。先证者肝功能及肾功能正常，平素无明显出血症状，无长期服用药物史，询问其家系成员均无出血史。先证者父母非近亲结婚。该家系三代共5名成员。 2、标本的采集、处理和DNA提取 征得先证者及家系成员知情同意后，采集静脉血，以0.109mol/L枸橼酸钠1:9抗凝，4℃3000 r/min离心15 min，吸取乏血小板血浆，分装后-40℃保存。家系所有成员外周血单个核细胞的基因组DNA用非离心柱型血液基因组DNA提取试剂盒抽提，-40℃保存备用。 3、凝血象检测 APTT、PT、FⅧ：C、FⅨ：C、FⅪ：C、FⅫ：C检测试剂采用法国STAGO公司试剂盒，仪器为STA-R血凝仪，检测原理均为一期凝固法；凝血因子Ⅺ抗原(FⅪ：Ag)检测采用酶联免疫吸附法(ELISA)；所有步骤均严格按照试剂说明书进行操作。 4、FⅪ基因分析 根据FⅪ基因序列(GenBank AY191837)，应用primer5软件设计13对引物以覆盖FⅪ基因的所有外显子区域及其侧翼序列。仪器为PCR扩增仪(ABI Thermlcycler2720，USA)；为了减少非特异性扩增条带，14号外显子的扩增采用touchdown PCR(TD PCR)。在1.2％琼脂糖凝胶上5μ l PCR产物进行电泳，采用Goldview标记PCR产物大小。PCR产物送上海桑尼生物科技有限公司进行测序，用Chromas软件和DNAMAN软件将测序结果与美国NCBI基因库所公布的FⅪ基因序列(GenBank AY191837)进行比对(Blaster)，寻找突变基因。 结果 1、遗传性FⅪ缺陷症家系凝血功能检测结果 先证者APTT延长，为50.0s/35s；先证者弟弟与儿子APTT同样延长，分别为53.7s/35s和51.8s/35s；家系其他成员APTT无明显延长。先证者及其弟弟、儿子和父亲的FⅪ：C明显减低，分别为22.5％、22.3％、35.5％和42.0％，FⅪ：Ag水平分别为29％、18％、29％和40％，表现为交叉反应物质(CRM)阴性。先证者母亲的凝血指标均在参考范围。 2、遗传性FⅪ缺陷症家系基因分析 对该FⅪ缺陷症家系成员所有15个外显子及侧翼序列进行PCR扩增，纯化扩增产物后进行测序。结果发现，先证者及其父亲、弟弟、儿子外显子8区(E8)存在C16642T杂合无义突变，使得编码第263位氨基酸的碱基发生突变CAA→TAA(Gln263stop)，对106名健康对照者进行筛查，排除了基因多态性的可能。该无义突变使得编码263位的氨基酸提前出现终止密码，形成截短型蛋白，此蛋白因缺失部分结构域，高度不稳定，并伴细胞内迅速降解，而导致FⅪ水平降低。此外，先证者外显子15区(E15)存在G25093T和1625120A突变，经DNAMAN软件处理后发现均为同义突变，查询相关网站(http://www.ncbi.nlm.nih.gov/SNP)发现二者均为多态性位点。 结论 1、该家系中先证者及其父亲、弟弟、儿子可诊断为遗传性FⅪ缺陷症交叉反应物质(CRM)阴性型。 2、FⅪ8号外显子C16642T杂合无义突变是导致该遗传性FⅪ缺陷症家系FⅪ水平降低的主要原因。 3、先证者15号外显子存在G25093T和G25120T杂合突变，均为同义突变，系为已报道的多态性位点。