目的:美托洛尔等β受体阻滞剂是心血管用药中的一线药物,临床上存在明显个体差异,同时发现似乎东方人比西方人对该药反应性更加敏感,这与基因剂量效应有很大关系。而在药物代谢和反应在个体和种族间的差异中药物代谢酶发挥了重要作用。主要分布于肝脏的细胞色素P450超家族(cytochrome P450s, CYP)是人体重要的代谢酶之一,其中细胞色素P4502D6(CYP2D6)是最有多态性的P450氧化代谢酶系。目前已发现CYP2D6有70多种突变基因,它的突变类型决定酶代谢活性[1]。CYP2D6的多态性决定了药物代谢强度的差异,并影响临床用药品种和剂量的选择。CYP2D6除参与代谢一些内源性物质和某些环境中毒性化合物外,还参与20%-30%的临床常用药物的代谢[2, 3],包括β受体阻滞剂、多种抗心律失常药、抗高血压药、抗抑郁、抗精神病药、镇痛药、镇咳药等。大部分脂溶性β受体阻滞剂如美托洛尔、普萘洛尔是由肝脏细胞色素酶CYP2D6代谢,而水溶性β受体阻滞剂如阿替洛尔和纳多洛尔则几乎以原药形式由肾脏排泄[30]。美托洛尔代谢途径主要有O-去甲基化、α-羟基化,其中O-去甲基化部分由CYP2D6催化,α-羟基化则完全由CYP2D6介导,生成α-羟基美托洛尔。大约口服剂量的70%～80%通过CYP2D6代谢,CYP2D6酶活性是影响美托洛尔代谢的一个主要因素。由于个体之间对该药物的有效性,副作用差异较大,在临床应用中存在无法预测其有效性,过度治疗,易导致严重副作用等情况,对该药物反应性与CYP2D6多态性关系以及人群种族间CYP2D6多态性基因突变情况的研究成为必然。CYP2D6基因的多态性决定酶活性,许多临床试验表明了基因型在药动学和药效学上具有重要意义,即出现基因剂量效应。CYP2D6基因的主要突变方式是单个碱基的缺失或替换引起读码框架移位,或是大片段基因的丢失。基因突变可以引起酶活性及数量的差异,从而造成人类对药物反应的显著个体差异。可将人群分为4种表型:超强代谢者( ultrarapid metabolizer UM )、强代谢者( extensive meabolizer EM)、中强代谢者(intermediate metabolizer IM)和弱代谢者(poor metabolizer PM)。其中,把携带两个以上活性等位基因(CYP2D6*1或CYP2D6*2)者称为UM,携带1个正常有活性等位基因者称EM,携2个导致酶活性降低的等位基因(CYP2D6*10)者为IM,携带2个无活性等位基因(CYP2D6*3,CYP2D6*4)或基因缺失(CYP2D6*5)者为PM。其中CYP2D6*1为野生型。基因突变可引起酶活性的消失、减弱和增强。人体代谢能力越强,药物在体内滞留时间越短。CYP2D6表型是用探针药物来判定的,可直观反映受试者对某些药物在体内代谢速度,但不能检测其基因型,且有些情况限制采用探针药物,存在价格昂贵、药物不良反应、伦理道德等问题。目前常采用多聚酶链反应对外周淋巴细胞的DNA分析进行基因型研究,可直接预测代谢表型。东方人中,最常见的CYP2D6基因型是CYP2D6*10,CYP2D6*10与野生型的CYP2D6相比,其中细胞色素酶CYP2D6外显子1上C188→T的点突变引起蛋白酶第34位Pro(P)变成Ser(S),G4268→C的碱基突变使第486位Ser(S)变为Thr(T),致使形成活性低且不稳定的代谢酶。其中C188T为引起功能改变的主要因素,对该基因点突变与药物间关系的研究较多。按基因型可分为:在外显子1第188位点上携带两个有活性等位基因的野生型纯合子C/C(CYP2D6*1/*1),携带两个导致酶活性降低的等位基因的突变纯合子T/T(CYP2D6*10/*10)和只含一个正常等位基因的杂合子C/T(CYP2D6*1/*10)。诸多研究表明西方人与东方人间CYP2D6*10等位基因突变频率存在明显种族差异,而我国CYP2D6*10基因多态性的研究由于样本量较少,研究方法不同,目前还存在研究结论出现偏差或可重复性差的情况,而整体研究样本量偏少,检验效能也必然受到影响。本研究旨在采用聚合酶链反应限制性片段长度多态性(PCR-RFLP)法研究较大样本的国人CYP2D6*10的基因多态性,了解C188T位点上的基因型频率和基因突变频率,以指导国人临床用药。方法:1血样采集采集491例国人上肢新鲜静脉血不少于3ml (EDTA抗凝)2基因组DNA的提取使用基因组DNA快速提取试剂盒,按说明书提取基因组DNA3 PCR-RFLP法分析CYP2D6*10基因多态性(1)PCR扩增基因片段272bp(2)RFLP分析基因型限制性内切酶进行酶切,电泳分析基因型:野生型纯合子C/C为213和59bp,杂合子C/T为213、112、101和59bp,突变型纯合子T/T为112、101和59bp用直接计数法计算其基因型频率及等位基因突变频率。运用Hardy-Weinberg平衡定律对基因型分布吻合度进行检验。对三种基因型间有无性别差异,本研究中的等位基因突变频率与各人群中等位基因突变频率有无差异进行卡方检验。结果:CYP2D6*10基因野生型纯合子C/C、杂合子C/T、突变型纯合子T/T基因型频率分别为16.7%、43.4%、39.9%。C、T等位基因频率分别为38.4 %和61.6%。比较三种基因型间有无性别差异,发现无统计学意义(P>0.05)。Hardy-Weinberg平衡检验(P>0.05)。χ2检验发现不同种族等位基因突变频率有显著差异,东方人群间等位基因突变频率没有显著性差异,华人人群间等位基因突变频率无显著差异。结论:CYP2D6*10基因野生型纯合子C/C、杂合子C/T、突变型纯合子T/T基因型频率分别为16.7%、43.4%、39.9%。等位基因突变频率为61.6%。三种基因类型间无性别差异。样本具有种群代表性。CYP2D6*10等位基因突变频率在东西方不同人群中有显著不同,在东方人和华人人群中大致相同。